人乳腺癌细胞 MCF-7.doc

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1、MCF-7人乳腺癌细胞 MCF-7细胞描述：       MCF-7细胞保留了多个分化了的乳腺上皮的特性，包括：能通过胞质雌激素受体加工雌二醇并能形成圆形复合物（domes）。 该细胞含有Tx-4癌基因。 肿瘤坏死因子α（TNF alpha）可以抑制MCF-7细胞的生长。 抗雌激素处理细胞能调变IGFBP’S的分泌。    MCF-7细胞增殖能力取决于细胞取材、培养技术、培养条件等综合因素。请按照正确的培养方法来解冻、传代，以此保证细胞具备良好的增殖能力，方便您的后继研究顺利进行。货号规格培养基运输保存C00401×106个/管DMEM+10% FB

2、S干冰运输液氮保存质量控制：   本细胞经过了检测，不含有细菌、真菌、病毒（HIV、HBV、HCV）、支原体。  培养条件：37℃，5% CO2，PH值7.2~7.4，无菌恒温培养。细胞相关操作（注意：细胞操作都需严格按照无菌操作）收到复苏好的贴壁细胞的处理方法：1. 先从外包装盒拿出细胞瓶，在细胞瓶表面喷一层酒精，并小心去掉封口膜；2. 在显微镜下观察细胞状态，并确定是否染菌，如有染菌，请立即拍照，并将细胞丢掉；3. 将培养瓶置于37°C，5% CO2的无菌培养箱中培养4-6小时；4. 倒掉多余的培养基，留正常体积的培养基；5. 重新将培养瓶置于3

3、7°C，5% CO2的无菌培养箱中培养过夜；6. 第二天传代。 收到冻存细胞的处理方法：1.37°C水浴预热培养基；迅速搅动2.从液氮中取出细胞迅速放入37°C水浴快速解冻（解冻后不要继续暖细胞）；3.在超净台中加入5ml培养基重悬细胞，1000rpm离心5min；4.弃上清，加入5ml培养基重悬细胞后转入T25培养瓶中，轻轻晃匀；5.置于37°C，5% CO2培养箱中培养(培养瓶盖没有透气孔的话，瓶盖不要拧太紧)；6.第二天，用新鲜的培养基给细胞换液后继续培养。细胞传代1.当细胞融合度达到90%以上时，给细胞传代；2.37°C水浴预热培养基；3.在

4、超净台中，弃培养基，加入2-5mlPBS清洗细胞后，再加入1ml胰酶消化细胞；4.显微镜下观察到细胞变圆，有细胞开始脱离瓶壁时，加入5ml培养基终止消化；5.用移液器轻轻吹下瓶壁上剩余的细胞，并轻轻吹打将细胞吹散；6.将细胞移入离心管中，1000rpm离心5min；7.弃上清，加入15-20ml的培养基重悬细胞后转入T75培养瓶中或按适当比例传到T25瓶中（确保细胞贴壁后融合度在25-50%之间），细胞密度在1×104 cells/cm2 (2.5×105 cells/T-25瓶），混匀细胞悬液，确保细胞均匀分布；8.将培养瓶置于37°C，5% CO

5、2的无菌培养箱中培养。细胞冻存1.37°C水浴预热培养基；2.消化细胞后给细胞计数:1)洗净晾干血小板计数板和盖玻片，将盖玻片完全覆盖计数区；2)充分混匀细胞，取少量(0.1-0.5ml)细胞悬液与等体积的染色液台盼蓝混合，移液器吹吸混合均匀，用移液器取20ul混合液从盖玻片两端(与中间凹槽平行的两端)分别打入细胞，以细胞悬液刚好浸湿盖玻片为佳；3)显微镜下，数四个计数区的总细胞数，无活性细胞染成蓝色，活细胞不被染色；4)细胞密度=细胞总数/4×10000×2；这里10000是不变的，因为计数的细胞是在体积为1mm×1mm×0.1mm即10-4cm3

6、计数池内，1cm3=1ml，将四个计数区的细胞数除以4取平均数，乘2是补偿加等体积台盼蓝形成的稀释。5)细胞活性=活细胞数/细胞总数×100%。注:细胞密度高时，可调整细胞悬液和台盼蓝的比例，计数时乘以相应的稀释倍数即可。3.当细胞密度达到传代密度且细胞活性在90%以上时，可以冻存细胞。4.在超净台中将要冻存的细胞移入离心管，1000rpm离心5min。5.弃上清，用90%培养液+10%DMSO的混合液重悬细胞，并调整细胞密度为1-3×106/ml。6.将细胞悬液分装到冻存管中(1-1.5ml/管)。7.将装有细胞的冻存管放入程序降温冻存盒，-20°

7、C放1-2h后，-80°C过夜，然后快速转移到液氮中。