金莲花黄酮对人乳腺癌细胞作用的研究

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1、金莲花黄酮对人乳腺癌细胞作用的研究作者：孙黎刘芳刘华罗强安芳【摘要】目的探讨金莲花黄酮对人乳腺癌MCF7细胞株细胞增殖抑制作用及对端粒酶活性的影响。方法不同浓度金莲花黄酮作用于MCF7细胞24h，以CCK8法检测细胞增殖抑制作用、流式细胞术检测端粒酶活性。结果9.516、6.344、3.172、1.586、0.793mg/ml5个不同浓度金莲花黄酮作用于MCF7细胞24h，对细胞增值的抑制率依次为17%、28%、48%、50%、55%。各实验组A490与对照组比较差异均显著（P＜0.05，P＜0.01)，且用药浓度与抑制率呈正相关；端粒酶活性均有不同程度降低、且端粒酶活

2、性与用药浓度成正比。结论金莲花黄酮对MCF7细胞有明显抑制作用并降低端粒酶活性。【关键词】金莲花黄酮；MCF7；CCK8；端粒酶活性　　【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheinhibitioneffectsandtelomeraseactivityofTrolliusflavonoidsonhumanbreastcancercelllineMCF7.MethodsMCF7cellsethod,andthetelomeraseactivityetry.ResultsTheinhibitionratesofMCF7cellprolife

3、rationentg/ml,respectively)for24h,andthereentalandcontrolgroups.Thereeraseactivityedegree,anderaseactivity.　　【Keyeraseactivity　　欧美国家新诊断的乳腺癌中≥65岁的病人约占一半〔1〕。在美国等西方国家及中国一些大中城市,乳腺癌已占居妇女恶性肿瘤死亡的首位〔2〕。近期研究表明金莲花具有抗病毒、抗氧化活性〔3，4〕，黄酮类化合物还有抗癌、降压和解痉作用〔5〕，临床上用于治疗慢性支气管炎、泌尿系感染、急性呼吸道感染等〔6～8〕，具有良好功效。但对金莲花黄铜的抗

4、肿瘤研究还未见报道。本研究主要探讨金莲花黄酮对人乳腺癌MCF7细胞增殖及对端粒酶活性的影响，从分子生物学水平揭示其作用机制，为金莲花黄酮进一步研究开发及临床治疗提供新的依据。　　1材料与方法　　1.1主要试剂和仪器MCF7细胞株由北京肿瘤研究所遗传室提供，本院实验中心细胞室传代、冻存；CCK8为上海同仁化学产品；DMEM培养基为美国Gibco公司产品，胎牛血清购自天津市川页生化制品有限公司,兔抗人端粒酶(Telomerase，TERT)单克隆抗体及荧光标记山羊抗兔IgG(FITC)均为美国BD公司产品。其他试剂是国产分析纯。美国StatFax2100酶标仪,美国FACS

5、Aria流式细胞仪。　　1.2金莲花黄酮的制备称取5.0g经清洗、烘干、去梗后粉碎的金莲花，置于250ml圆底烧瓶中，按正交表，加入相应的溶剂，充分振荡，浸泡1h后于恒温水箱中回流提取（每隔10min振荡1次），过滤。再按同法二次提取，合并滤液，减压浓缩，定容至25ml,8磅15min高压灭菌4℃保存。　　1.3MCF7细胞培养于DMEM培养液中加入10%胎牛血清及100U/ml庆大霉素，用7.6%NaHCO2调至pH7.4，加入复苏的MCF7细胞，置37℃、5%CO2培养箱进行培养。每2～3d换1次培养液。当细胞生长至对数生长期加入不同浓度金莲花黄酮处理。　　1.4CCK

6、8法检测金莲花黄酮对肿瘤细胞的抑制作用取对数生长期密度为2×105/ml的MCF7细胞，接种于96孔培养板上，100μl/孔。用DMEM培养液将金莲花黄酮稀释成9.516、6.344、3.172、1.586、0.793mg/ml5个不同浓度，并分别加入96孔培养板（100μl/孔），每组设4个复孔，对照组加入等体积培养液，培养24h。实验终止前4h每孔加入CCK820μl，10min后以酶标仪检测吸光度（A490值），按公式计算MCF7细胞抑制率。抑制率(%)=(1-实验组平均A490值/对照组平均A490值)×100%。　　1.5不同浓度金莲花黄酮对MCF7细胞TE

7、RT定量表达的测定取对数生长期MCF7细胞(密度为1×106/ml)分别接种于25只50ml的培养瓶，1.5ml/瓶，实验组分别加入6.344，3.172，1.586mg/ml浓度的金莲花黄酮1.5ml，对照组加入1.5ml培养液，空白组加入1.5mlPBS(pH7.4)，每个浓度设5个复孔。培养24h后,用4℃缓冲液离心1500r/min、7min洗2次(去上清),用4%多聚甲醛1ml悬起细胞,室温孵育10min。同法用4℃缓冲液洗1次(去上清),加甲醇1ml悬起细胞,室温孵育10min