金莲花中总黄酮抗氧作用的研究

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1、金莲花中总黄酮抗氧作用的研究作者：颜娟，胡海娜，田嘉铭，杨国栋，曲彩红，王书华，安芳【摘要】　　目的研究金莲花中总黄酮抗氧作用的能力。方法用分光光度法测定金莲花总黄酮对O2-·、·OH、DPPH的清除作用和对红细胞膜的保护作用，并与维生素C比较。结果金莲花总黄酮有抑制O2-·、·OH、DPPH的能力和保护红细胞膜的作用，金莲花总黄酮的浓度与抑制O2-·、·OH、DPPH的能力和保护红细胞膜的能力呈量-效关系。结论金莲花总黄酮具有较强抗氧作用。【关键词】金莲花　总黄酮　抗氧化金莲花TrolliuschinensisBunge.为毛

2、茛科植物金莲花的干燥花。据记载，金莲花的功效为清热解毒［1］。现代药理研究表明金莲花具有很好的抗菌、抗病毒作用［2］。金莲花中总黄酮是其有效成分。本实验通过研究金莲花总黄酮对超氧阴离子、羟自由基、DPPH清除能力与红细胞膜的保护作用证明金莲花总黄酮的抗氧作用。1材料与仪器药品和试剂金莲花采自河北省张家口坝上地区，经河北北方学院中医系中药教研室马淑兰教授鉴定为金莲花。芦丁标准品，DPPH(二苯代苦味酰基苯肼自由基，美国），维生素C。邻苯三酚，双氧水，邻二氮菲，硫酸亚铁，Tris-HCl，磷酸氢二钠，磷酸二氢钠，亚硝酸钠，硝酸铝，氢

3、氧化钠均为分析纯。生理盐水，实验用水为三重蒸馏水。动物昆明种小鼠。仪器DZ-1BC型真空干燥箱；中药粉碎机(浙江省温岭市大海药材器械厂)；电热恒温水槽(上海精宏实验设备有限公司)；循环水式真空泵(巩义市英峪于华仪器厂)；756MC紫外可见光分光光度计(上海分析仪器总厂)；GR-202型分析天平(日本)；Heraeus低温高速离心机(德国)。　2方法与结果.1金莲花中总黄酮的提取、纯化、含量测定称取已洗净干燥粉碎的金莲花，60%乙醇提取，提取两次，合并两次提取液，过滤，适当稀释，石油醚萃取，经D-101大孔树脂纯化，真空干燥成粉末

4、即得金莲花总黄酮。采用亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠比色法测定总黄酮含量为%。.2金莲花总黄酮抗氧实验.清除超氧阴离子自由基的活性［3］邻苯三酚在弱碱性Tris-HCl缓冲液()溶液中自身氧化产生O2-·，随着反应进行O2-·在体系中不断积累，反应min后体系在32nm处的吸光度值随时间变化呈量效增大，而O2-·清除剂能使邻苯三酚自氧化产物在32nm处吸收峰受抑制通过光化学方法测定A值，求抑制率。抑制率=Acontrol-AsampleAcontrol×100%　　取6支具塞试管，依次加入pH值的，三蒸水、总黄酮，在25℃水浴保温2

5、0min，加入在25℃水浴保温的邻苯三酚(用10mmol·L-1HCl配置，浓度为mmol·L-1)后，准确反应min，加入10mmol·L-1的HCl终止反应，终体积为ml。用相应空白试剂作对照，在32nm处测吸光度值A。总黄酮的终浓度分别为，10，20，40，60μg·ml-1，每管平行5次。以维生素C做阳性对照组，分别计算抑制率。见表1。表1金莲花中总黄酮清除超氧阴离子的测定结果求得总黄酮IC50=μg·ml-1，维生素CIC50=.10μg·ml-1。.对羟基自由基的作用Fe2+/H2O2体系通过Fenton反应产生·O

6、H，邻二氮菲-Fe2+被·OH氧化成邻二氮菲-Fe3+后，Fe2+与邻二氮菲形成的红色配合物颜色变浅，在510nm处的吸光度值减小，当体系中加入·OH清除剂后，此氧化过程受抑制，用在510nm处的吸光度值的变化高低来表明抗氧化能力高低。取7支试管，依次加入2.μg·ml-1的邻二氮菲，pH值.4的PBS1ml，不同浓度的总黄酮，mmol·L-1的，用三蒸水补足体积至ml，混匀后置37℃水浴中保温60min，在510nm处测吸光度值A。用相应空白试剂作对照。总黄酮的终浓度分别为50，60，70，80，90μg·ml-1，每管平行5

7、次。以VitC做阳性对照组，分别计算抑制率。求得总黄酮IC50=μg·ml-1，维生素CIC50=μg·ml-1。表2金莲花中总黄酮清除·OH的测定结果抑制率=Asample-AblankAcontrol-Abland×100%.对DPPH的影响［4］DPPH是以氮为中心的稳定自由基，在320nm，51nm处有两个吸收峰，当加入该自由基清除剂后吸收峰均减弱，但在51nm处减弱明显，故选择测517nm处的A值来反映清除该自由基的能力。取7支试管，依次加入·L-1的DPPHml，不同浓度的总黄酮，用无水乙醇补足体积至ml，混匀避光，

8、暗室下反应20min，取出后于51nm处测吸光度值A，用相应空白试剂作对照。总黄酮的终浓度分别为1，2，4，6，8，10μg·ml-1，每管平行5次。以维生素C做阳性对照组，分别计算抑制率。求得总黄酮IC50=.90μg·ml-1，维生素CIC50=.30μg·