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1、金莲花总黄酮纯化研究(作者:单位:邮编:)作者：颜娟曲彩红田嘉铭安芳王书华【摘要】目的：利用正交试验，优选金莲花总黄酮的纯化方法。方法：以总黄酮含量为考查指标，选择大孔吸附树脂、乙醇浓度、上样量、洗脱速度和吸附时间五个实验因素，采用L16(45)正交实验表进行实验，筛选出总黄酮的最佳纯化工艺。结果：影响金莲花总黄酮含量的主要因素是乙醇浓度，其次是大孔吸附树脂的类型。按最佳方案纯化，总黄酮含量可达到69.1%o结论：最佳纯化方法为：采用大孔吸附树脂D-101,以50%乙醇洗脱，最佳上样量10mL,吸附时间20min,洗脱速度2.0mL-min-1o【关键词】金莲花；黄酮；正交试
2、验；纯化[ABSTRACT]Objective:Withthemethodoforthogonal-test,tooptimizethemethodofpurifyingtotalflavonoids.Methods:Takingthecontentoftotalflavonesasindexes,theorthogonaldesignwasdonewithfivefactors:macroporousadsorptionresin,eluent,samplevolume,elutionspeedandadsorptiontimebyorthogonaldesigntable
3、L16(45).Results:ThemainfactorinflucingthecontentoftotalflavonesinTrolliuschinensisBungewaseluent,thenextwasdifferenttypesofmacroporousadsorptionresin.ThebestmethodofpurifyingthetotalflavonoidswasD・101macroporousadsorptionresinwith50%ethanolelution,thesamplevolumereaching10mL,20minadsorption
4、timeand2.0mL/minelutionspeed.Conclusion:Thecontentoftotalflavonesreachedwas69.1%whichwasthebestoptimumselection.[KEYWORDS]TrolliusChinensis,Flavone,OrthogonalTest,Purifying金莲花是毛萇科植物金莲花(TrolliuschinensisBunge)的干燥花及花蕾，主要产于中国西南、西北、华北、东北及台湾等省区，赵学敏所著的《本草纲目拾遗》谓其“味苦、性寒、无毒”，可“治口疮、喉肿、浮热牙宣、耳疼、目痛”，并具“
5、明目、解岚障”之功效。现代药理研究发现金莲花主要有效成分为黄酮类化合物口]，具有抑菌、抗病毒、抗氧化等功效[2-4]o采用大孔树脂对金莲花总黄酮提取物进行初步分离，对后续金莲花中药草昔、牡荆昔的纯化及单体制备有着重要的意义。DM-301型大孔吸附树脂对金莲花总黄酮有较好的吸附与解吸特性，适合用于金莲花总黄酮的分离与纯化[5],AB-8吸附树脂纯化的总黄酮纯度为38.19%,比粗提物的总黄酮纯度提高了2.88倍[6]o本研究采用正交设计筛选金莲花中总黄酮纯化的最佳条件。1仪器与试剂756紫外分光光度计（上海精密仪器有限公司）,HH-W600数显三用恒温箱（金坛市医疗仪器厂），高
6、速冷冻离心机（德国Heraeus）,自动三重纯水蒸馆器（上海），真空冷冻干燥机（美国热电），A/DGR202分析天平（日本，十万分之一）,真空干燥箱（天津市泰斯特仪器有限公司）,玻璃层析柱（1.5cmx40cm'大孔吸附树脂D-101,AB-8,XDA-1,DM-301均为净品级。野生金莲花采自河北省张家口坝上地区，经河北北方学院中医系中药教研室马淑兰教授鉴定为短瓣金莲花。无水乙醇，亚硝酸钠，硝酸铝，氢氧化钠均为分析纯。芦丁标准品（中国生物制品药品鉴定所）□实验用水为三蒸水（实验中心自制）。2方法2.1因素水平的确立选取不同型号大孔吸附树脂，乙醇浓度，上样量，洗脱速度，吸附时
7、间为考察因素，设计4个水平（见表1）。表1因素水平表2.2金莲花总黄酮的提取取已干燥粉碎的金莲花10.0g，以20倍量的60%乙醇于809水浴回流提取1.5h,提取两次，合并两次滤液，过滤，10OOOrpm离心，收集上清液，石油,减压浓缩，真空冷冻干燥，得金莲花总黄500mL,备用。2.3大孔吸附树脂预处理[7]树脂加95%乙醇浸泡24h,湿法上柱，用乙醇清洗，至流出液与水混合(1:5)不呈白色混浊为止，然后以大量三蒸水洗去乙醇至无醇味，备用。2.4金莲花总黄酮的纯化依正交设计进行16组实验条件下的总黄
