大孔树脂法纯化苦丁茶总黄酮的研究

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1、大孔树脂法纯化苦丁茶总黄酮的研究【摘要】目的确定大孔树脂分离苦丁茶总黄酮的最佳工艺条件。方法以吸附率及解吸率为考察指标，确定最佳型号树脂，静态和动态吸附及解吸的相关影响因素。结果HP-20型大孔树脂对苦丁茶总黄酮有良好的吸附，其吸附分离的工艺条件的药液浓度为1.2mg/ml，以3m1/min吸附速率进行吸附，2.5倍柱体积的70%乙醇洗脱效果最佳。结论该方法简单易行，分离效果好，适于苦丁茶总黄酮的分离纯化。【关键词】大孔树脂;纯化;苦丁茶;总黄酮　　Abstract：ObjectiveToestablishtheoptimumprocessconditionsforpurificati

2、onofflavonoidsfromKudinchabymacroporousresin.MethodsSeventypesofmacroporousresinummacroporousresin，relativefactorsofabsorptionanddesorptionforstaticstateanddynamicstateinedacroporousresinhadgoodabsorbingeffectonflavonoidsofkudincha.Theliquidconcentrationofabsorbingandseparatingtechnologicalenvir

3、onmentg/mlandtheabsorbingspeed1/min.Theelutioneffectof70%alcoholesvolumeethodissimpleandfeasibleandfitforseparationandpunifiationofflavonoidsfromKudincha.　　Keyl的容量瓶中，按“2.2”项方法操作，测定并计算总黄酮的含量。　　2.5大孔树脂的筛选　　2.5.1静态吸附取7种处理好的大孔树脂各10g，分别加入苦丁茶水溶液30ml，开始每5min振摇1次，2h后静置，6h后分别取各树脂吸附后的溶液于510nm处测定吸光度，计算各种树脂

4、对苦丁茶总黄酮的吸附量和吸附率[3]。　　2.5.2静态解吸静态吸附后的树脂过滤抽干，加30ml70%乙醇解吸，置于摇床上，4h后分别取各解吸液0.2ml，于510nm处测定吸光度，计算各种树脂对苦丁茶总黄酮的解吸率[3]。　　2.6树脂动态吸附苦丁茶总黄酮的工艺参数考察通过树脂对黄酮的静态吸附试验，对筛选出的一种理想树脂进行上样液的流速，浓度、洗脱剂的浓度以及解吸曲线等工艺参数进行考察。将预处理好的树脂装入玻璃层析柱中，将黄酮提取液上柱，控制一定流速，分步收集(3ml/管)，当流出液吸光度达上样液的1/10时，认为黄酮已透过，停止上样，计算吸附量。　　3结果　　3.1大孔树脂的筛选采

5、用静态吸附量、吸附率和解吸率选择树脂。由表1可看出，吸附树脂在分离植物有效成分时利用的是吸附的可逆性，由于树脂极性不同，解吸的难易也不同，所以解吸率是筛选树脂的重要因素。HP-20，AB-8树脂解吸率较高，而HP-20树脂的吸附率高于AB-8树脂，因此本实验选用HP-20型树脂纯化苦丁茶中的总黄酮。　　3.2HP-20树脂的静态吸附动力学特性测定HP-20有较高的吸附率和解吸率，因此选择HP-20树脂进行静态吸附动力学曲线。由图1可知，HP-20树脂对苦丁茶总黄酮的吸附为快速平衡型，即在起始阶段吸附量比较大，在5h内基本接近达到平衡。HP-20树脂对苦丁茶总黄酮具有良好的静态吸附动力学

6、特性，较适宜于苦丁茶总黄酮纯化。表1大孔树脂静态吸附率与解吸率　　3.3树脂动态吸附苦丁茶总黄酮的工艺参数考察　　3.3.1上样流速的确定上样流速是影响树脂吸附性能的重要因素之一。将上样流速分别控制为1，2，3，4，5ml/min进行动态吸附，流速对吸附量的影响(见图2)。由图2可以看出，当流速超过3ml/min时，树脂的吸附量明显下降。因此上样流速为3ml/min为宜。　　图2上样流速对吸附量的影响　　3.3.2上样液浓度的确定将苦丁茶总黄酮提取液加水稀释成不同浓度的上样液，进行动态吸附实验。(见图3)。在低浓度下，随着黄酮浓度增加，树脂吸附率增大;在黄酮浓度为1.2mg/ml时，树

7、脂具有最大吸附率;而黄酮浓度大于1.2mg/ml后，树脂吸附率反而下降，因此上样液浓度为1.2mg/ml为佳。　　图3上样液浓度对吸附率的影响　　3.3.3洗脱剂浓度的确定由于乙醇毒性低，易浓缩回收，适于用作洗脱剂。本实验分别选择了不同浓度的乙醇水溶液作为洗脱剂，考察其解吸率(见图4)。70%以上的乙醇水溶液解吸效果最好解吸率达88.5%，因为乙醇的浓度不同，其极性大小也不同，70%乙醇的解吸率较高可能是由于其极性和苦丁茶总黄酮的极性更加接近。