大孔吸附树脂分离纯化鬼针草总黄酮的研究

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1、大孔吸附树脂分离纯化鬼针草总黄酮的研究【关键词】 鬼针草；,,总黄酮；,,大孔树脂摘要：目的研究大孔吸附树脂富集纯化鬼针草总黄酮的最佳工艺条件及参数。方法采用不同浓度的乙醇梯度洗脱,以紫外分光光度法测定鬼针草总黄酮收率和纯度为指标。结果实验条件下，采用D301型大孔树脂进行吸附,20%乙醇100ml洗脱，经大孔树脂处理后浸膏的总黄酮含量可达60%以上。结论该法可为鬼针草新制剂的研制与生产提供原料药。关键词：鬼针草； 总黄酮； 大孔树脂StudyontheIsolationandPurificationofTotalFlavonoids

2、fromBidensbipinnataL.withMacroporousResinAbstract：ObjectiveToexploretheoptimalpurificationconditionoftotalflavonoidsfromBidensbipinnataL.withmacroporouselutionwasusedtoelutethecomponentsabsorptedonmacroporousresinguidedbytheisolation-purificationdegreeandtherecoveryThec

3、ontentoftotalflavonoidsinobtainedointmentcouldreach0%undertheconditionthatD301typemacroporousresinwasusedasabsorptionagentand100ml0%ethanolaselutionmethodappearedtobefeasibletoisolateandpurifytotalflavonoidsfromBidensbipinnataL..Keywords：BidensbipinnataL.;  Totalflavono

4、ids; Macroporousresin　　鬼针草为菊科植物鬼针草的全草，具清热解毒、散瘀消肿之功效［1］，药理和临床报道对原发性高血压有明显疗效，其降压有效成分主要为黄酮类化合物［2］。目前国内上市的有关鬼针草提取物的制剂主要有鬼针草颗粒剂、悦年片、悦年茶等，鬼针草药源充足，价格低廉，开发前景广阔。本实验采用大孔树脂对鬼针草总黄酮进行了分离纯化，工艺简单，切实可行，可为含鬼针草新制剂的研制与生产提供原料药。　　1 器材UV757CRT紫外可见分光光度计(上海分析仪器总厂)；电子精密天平。鬼针草BidensbipinnataL.购自

5、山东建联中药店，经该店姚庭芝主任药师鉴定，芦丁对照品购自中国生物制品检定所，大孔树脂分别购于天津南开大学、成都晨光化工研究院及日本三菱公司。所用试剂均为分析纯。　2 方法与结果.1 鬼针草总黄酮的含量测定. 标准曲线制备精密称取经五氧化二磷干燥恒重的芦丁对照品mg，30%乙醇溶解并定容至2ml，即得每毫升含无水芦丁的芦丁对照品溶液。分别精密量取0，，，，，，ml芦丁对照品溶液置于10ml容量瓶中各加30%乙醇至1ml，加入5%放置min后再加入10%Al(NO3)，摇匀放置min后加入4%NaOHml，摇匀放置1min在510nm处测

6、定。以相应试剂做空白分别测定吸光度，以吸光度对浓度进行回归，绘制标准曲线，回归方程：Y=，r=。. 鬼针草药材总黄酮的含量测定精密称取鬼针草g，加入60%乙醇100ml，置沸水浴中回流1h，冷却，过滤，用60%乙醇50ml洗涤，移液至250ml容量瓶，用60%乙醇定容至刻线，精密量取鬼针草溶液ml，至10ml刻度试管中，按标准曲线制备项下方法测定含量，鬼针草中总黄酮的含量mg・g1。.2 大孔树脂纯化工艺的考察. 大孔树脂的预处理将树脂装入吸附柱中，并保持5%乙醇面高出树脂表面浸泡。95%乙醇洗涤树脂层，至流出液加蒸馏水不呈白色浑浊，

7、再用蒸馏水洗至无醇味即可。用后的树脂以95%乙醇洗涤至洗脱液近无色，再用蒸馏水洗涤树脂层至无醇味，必要时用1～2倍树脂体积的4%ＮaＯＨ溶液洗涤树脂层，而后用蒸馏水洗至pH为7，即可进行下一周期的使用。. 洗脱溶剂的确定取处理好的大孔树脂10ml填充于cm×20cm的柱内，将鬼针草水提液(相当于原生药・ml1)上柱，控制流速・min1，分别用60，60，60，60，60，90，90ml，浓度为10%，15%，20%，25%，30%，40%的乙醇溶液进行梯度洗脱，每隔1ml收集1次，摇匀，各取1ml按标准曲线制备项下制备样品，510nm

8、处测吸光度。结果见图1。结果表明，100 ml10%~15%的乙醇即可将吸附在树脂柱上的鬼针草总黄酮洗脱完全，故本实验选用20%乙醇100ml进行洗脱。. 上样量考查分别取相当于，，，，g鬼针草药材的水提液(相当于原生药