金莲花黄酮对人乳腺癌细胞作用的研究

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1、金莲花黄酮对人乳腺癌细胞作用的研究作者：孙黎刘芳刘华罗强安芳【摘要】目的探讨金莲花黄酮对人乳腺癌MCF7细胞株细胞增殖抑制作用及对端粒酶活性的影响。方法不同浓度金莲花黄酮作用于MCF7细胞2h，以CCK8法检测细胞增殖抑制作用、流式细胞术检测端粒酶活性。结果.516、、、、/ml个不同浓度金莲花黄酮作用于MCF7细胞2h，对细胞增值的抑制率依次为17%、28%、48%、50%、55%。各实验组A490与对照组比较差异均显著，过滤。再按同法二次提取，合并滤液，减压浓缩，定容至2ml,8磅1min高压灭菌4℃保存。MCF7细胞培养

2、于DMEM培养液中加入10%胎牛血清及100U/ml庆大霉素，用%NaHCO2调至，加入复苏的MCF7细胞，置3℃、5%CO2培养箱进行培养。每2～d换1次培养液。当细胞生长至对数生长期加入不同浓度金莲花黄酮处理。CCK8法检测金莲花黄酮对肿瘤细胞的抑制作用取对数生长期密度为2×105/ml的MCF7细胞，接种于96孔培养板上，100μl/孔。用DMEM培养液将金莲花黄酮稀释成、、、、/ml个不同浓度，并分别加入96孔培养板，每组设4个复孔，对照组加入等体积培养液，培养2h。实验终止前h每孔加入CCK20μl，10min后以酶标

3、仪检测吸光度，按公式计算MCF7细胞抑制率。抑制率(%)=(1-实验组平均A490值/对照组平均A490值)×100%。不同浓度金莲花黄酮对MCF7细胞TERT定量表达的测定取对数生长期MCF7细胞(密度为1×106/ml)分别接种于25只50ml的培养瓶，/瓶，实验组分别加入，，/ml浓度的金莲花黄酮，对照组加入培养液，空白组加入PBS()，每个浓度设5个复孔。培养2h后,用4℃缓冲液离心100r/min、min洗2次(去上清),用4%多聚甲醛1ml悬起细胞,室温孵育10min。同法用4℃缓冲液洗1次(去上清),加甲醇1ml悬起

4、细胞,室温孵育10min。同法用4℃缓冲液洗1次(去上清),用%TristonX100液1ml悬起细胞,选用一抗稀释液100μl混匀室温避光孵育30min,4℃缓冲液洗1次(去上清)。选用荧光标记二抗稀释液100μl悬起细胞,室温避光孵育30min,用4℃缓冲液离心洗1次(去上清),用PBS缓冲液配制%多聚甲醛250μl悬起细胞,4℃冰箱保存2h,上机测试。实验组加兔抗人TERT抗体和山羊抗兔IgG(FITC)各100μl及不同浓度的浓度金莲花黄酮,空白组加等量的PBS()代替一抗和二抗,对照组不加药物加一抗和二抗。人乳腺癌细胞MCF

5、7加金莲花黄酮后流式细胞仪定量检测荧光素标记山羊抗兔IgG与兔抗人TERT抗体结合TERT蛋白表达。统计学处理应用软件行t检验。　2结果.1金莲花黄酮对MCF7细胞增殖的抑制作用.516、、、、/ml个不同浓度的金莲花黄酮对MCF7细胞的生长的抑制作用随着浓度的增加而增加，分别为17%、28%、48%、50%及55%。各实验组A490与对照组比较，差异均显著，且金莲花黄酮对人乳腺癌细胞MCFTERT的作用呈剂量依赖性。　3讨论　　现代医学研究表明，肿瘤是细胞增殖、分化和细胞凋亡异常引起的以细胞失控性生长和增殖为主要特征的疾病。细

6、胞凋亡是细胞在一定的生理或病理条件下，自己结束其生命的过程，具有严格的基因失控性和选择性〔9〕。乳腺癌的发生发展同其他肿瘤性疾病一样，不仅与细胞的异常增殖和分化有关，也与细胞凋亡的异常有关。　　真核细胞染色体末端含有串联重复的DNA序列称为端粒,TERT是由RNA和蛋白质组成的核糖核蛋白酶,含有引物特性和识别位点,能以自身的RNA组分为模板合成DNA的TTAGGG重复序列,并加到染色体的末端以补偿细胞分裂时染色体末端的缩短。对肿瘤的研究发现,大多数癌细胞系和肿瘤细胞中端粒酶均有高水平表达,表明端粒酶的激活表达与细胞的无限增殖有密切关系〔

7、6，10〕。那么控制TERT的激活,减少肿瘤细胞中TERT的数目,使其不再有保护端粒长度稳定不变的功能,从而达到抑制肿瘤细胞增殖、诱导凋亡的目的,可能会成为新的肿瘤治疗方向。　　本研究结果表明，金莲花黄酮在体外对乳腺癌细胞具有抗肿瘤活性。流式细胞术检测TERT活性结果显示，TERT量的均数依所加入金莲花黄酮量的逐次减少而增加。可以进一步证实金莲花黄酮抑制人乳腺癌细胞MCFTERT的活性,具有明显的抗肿瘤作用,为今后金莲花黄酮用于肿瘤的治疗提供了理论依据。【参考文献】1Musstherapyforolderbreastcancerpat

8、ients〔J〕.Breast003；12(6)：5507.　　GennariR，CariglianoG，RomenszN，etcarcinomainelderlywomenfeatruesoflocal