杨梅黄酮对人肝癌细胞hepg2自噬的诱导作用及其机制研究

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1、分类号：单位代码：密级：无学号：硕士文中文论文题目：杨梅黄酮对人肝癌细胞自噬的诱导作用及其机制研究英文论文题目申请人姓名曹建平指导教师：夏大静教授专业名称：免疫学研究方向：噬与肿瘤所在学院：浙江大学医学院提交日期年月杨梅黄酺对人肝癌细胞自噬的诱导作用论文作者签名：璀衆午指导教师签名：论文评阅人杨军教授杭州师范大学健康管理系评阅人曾群力教授浙江大学公共卫生系评阅人孙文均教授浙江大学公共卫生系答辩委员会主席：刘伟教授浙江大学基础医学系委员王晓健教授浙江大学免疫所委员朱心强教授浙江大学公共卫生系答辩日期：浙江大学研究生学位论文独创

2、性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得浙江大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期：学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解浙江大学有权保留并向国家有关部门或机构送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权浙江大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索

3、和传播，可以釆用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。保密的学位论文在解密后适用本授权书）签字曰期：飞、：签字曰期浙江大学硕士学位论文致谢致谢光阴飞逝，在浙江大学近年的美好时光匆匆而去。又到了人生的一个转折点，即将迎来新的挑战。回首过去，在研究生求学的时光里，有过抱怨，有过挣扎，有过气馁，有过失望，但最终都过来了。不管是进步还是后退，不管是成长还是跌倒，不管是欢笑还是哭泣，都是身边的人陪我度过感谢所有陪伴过我的每一个人。在此，首先向我的指导老师夏大静教授表示衷心的感谢，由衷的感谢您在研究生阶段在学习、生活、工作等各方

4、面对我的关心和谆谆教导，让我能够顺利完成学业。您工作上一丝不苟的作风和严谨求实的态度，让我受益匪浅；您生活中的谦和、设身处地为他人着想的高尚情操让我深受感动。再次感谢您的教导！特别感谢新加坡国立大学沈汉明教授的无私帮助，不仅馈赠研究中所需的细胞株和抗体，还在课题的进展上给予关键性的指导。没有沈老师的帮助，就没有课题的顺利进行。衷心感谢朱心强教授、杨军教授、郑一凡老师、章军老师、余沛霖老师、徐玉英老师、吴一华老师在这两年多时间里给我的帮助和支持，你们严肃的科学态度和严谨的治学精神，值得我们学习。感谢黄芳、段婷、李金、徐见、徐钦

5、、葛娟、解淑钩、刘巧云、孙文杰等师兄弟姐妹在学习和实验上的帮助，在生活上的关心和照顾，让我感到一个大家庭的温暖浙江大学硕士学位论文致谢感谢王金艳、黄璜、肖娜三位舍友陪伴我走过在浙近三年的美好时光，是你们陪我逛街，陪我看电影，陪我骑行。周末我们一起睡懶觉，一起打球，晚上躺在床上聊科研聊八卦，你们让我的生活更加丰富多彩。感谢浙大医学部公共技术平台的所有老师们的技术支持。感谢一直默默支持和关心我的父母和朋友们！浙江大学硕士学位论文中文摘要杨梅黄酮对人肝癌细胞自噬的诱导作用及其机制研究浙江大学医学院硕士研究生：曹建平导师：夏大静教授

6、中文摘要目的研究杨梅黄酮（对肝癌细胞细胞自噬的影响及其相关机制。方法倒置显微镜下直接观察杨梅黄酮处理细胞后的细胞形态变化；法检测不同浓度（，，，，的杨梅黄酮作用不同时间（，，后对细胞增殖的影响；以荧光显微镜观察不同浓度杨梅黄酮处理稳转株细胞后，细胞内绿色荧光的变化；以流式细胞术检测不同浓度杨梅黄酮单独处理或联合氯喹处理细胞后细胞的凋亡情况；法检测杨梅黄酮单独或联合氯喹共同作用细胞后，在不同时间点自嘆标志蛋白的表达水平，以及自噬调控通路蛋白、、、和型复合体相关蛋白型、、的表达情况。结果以高浓度（及以上浓度）的杨梅黄酮处理细胞小

7、时后，细胞发生变圆漂浮，发生一定程度的皱缩，细胞数量减少。低浓度（、处理细胞小时，细胞增殖未见明显变化；较高浓度（及以上）的杨梅黄酮处理小时始，即可抑制细胞的增殖，且呈一定的剂量和时间浙江大学硕士学位论文中文摘要依赖效应；以不同浓度（杨梅黄酮单独处理细胞小时后，蛋白水平有所升高，尤以、浓度更为明显；杨梅黄酮与氯喹共同作用细胞后，蛋白水平显著增加，并高于杨梅黄酮、氯喹单独处理组。选用浓度杨梅黄酮处理细胞不同时间、、后，小时组增加最为明显，且蛋白含量减少最显著；以不同浓度（杨梅黄酮单独处理稳转细胞株亮点数增加；、杨梅黄酮处理对细

8、胞凋亡几乎没有影响，及以上浓度杨梅黄酮可引起细胞凋亡。与氯普联合作用抑制自噬后，细胞凋亡水平明显上升；杨梅黄酮处理细胞后磷酸化水平、底物蛋白磷酸化水平都有降低；而型、表达有所增加，抗凋亡蛋白减少。结论及以上浓度的杨梅黄酮抑制细胞增殖，其抑制作用呈剂量和时间依赖性；及以上浓度的杨梅黄酮可引起