西黄丸含药血清对人乳腺癌细胞生长的影响

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1、西黄丸含药血清对人乳腺癌细胞生长的影响【关键词】西黄丸含药血清人乳腺癌细胞细胞周期　　TheEffectsofXihuangPillDrugSerumontheGroanBreastCarcinomaCells　　Abstract：ObjectiveToinvestigatetheeffectsofXihuangpilldrugserumonthegroorcelletry.ResultsXihuangpilldrugserumhadaninhibitoryeffectontherumorcell,content.Typitalmor

2、phologicalchangesofapoptosisissionelectronmicroscope.FCMshofor24h,theratioofcellsinSphaseincreased,ent,theratioofcellsinG0/1phaseincreased,andSphasedecreased.ConclusionXihuangpilldrugserumcaninhibitthegroacell(MCF-7)anditscellcycleinvitro.　　Key；Humanbreastcarcinomacells

3、；Cellcycle西黄丸，又名犀黄丸，方出清—王洪绪所著《外科证治全生集》，为治疗“乳岩”“瘰疬”“痰核”“肺痈”之名方［1］。其成分为牛黄、麝香、乳香、没药。主要功能为消坚化结、解毒散痈、消肿止痛。现代主要用于痈疽疮毒和各种恶性肿瘤的治疗。临床和现代药理研究［2，3］表明，本方可抑制体内外肿瘤的生长，本研究采用血清药理学方法，观察西黄丸人乳腺癌细胞增殖的抑制及细胞周期的作用机制。　　1材料　　1.1细胞与细胞培养人乳腺癌细胞系（MCF7）由吉林省肿瘤防治研究所提供。接种于含100μ/ml青霉素、100mg/ml链霉素和10%胎牛

4、血清的1640培养液中，置于含5%CO2，37℃的培养箱中培养。待细胞形成单层，常规消化，收集细胞，0.5%苔盼蓝染色，其细胞活性在98%以上。　　1.2含药血清的制备西黄丸按2g/kg剂量和10ml/kg给药液体量，将西黄丸用蒸馏水配成相应悬液，以SD大鼠6只，按剂量每天灌胃给药（10ml/kg），连续7d。于末次给药后1h（灌胃前禁食12h），以20%乌拉坦，10ml/kg腹腔注射麻醉，腹主动脉采血，无菌分离血清，经过56℃，30min灭活后，置-80℃冰箱保存备用。　　1.3试剂、药品、动物1640培养液、胎牛血清、胰蛋白酶购自

5、APerstorpLifeSciencespany.PI染色剂，购自美国BD公司，MTT及其它常用试剂购自华美公司。CV级SD大鼠，体重180～220g，雌雄各半。购于大连医科大学实验动物中心，许可证号SCXK（辽）20020002。西黄丸，九寨沟天然药业集团有限责任公司生产，批号050601。顺铂，德州德药制药有限公司生产，批号050303。　　1.4仪器全自动酶标仪，流式细胞仪FACSort，美国BD公司。　　2方法　　2.1噻唑蓝还原法（MTT）取处于指数生长期的细胞株配成4×104/ml，加入96孔板，100μl/孔，在37

6、℃，5%CO2条件下培养24h，弃培养液，分别加入2.5%，5%，10%，15%，20%的含药血清，设不含药的血清（血清浓度20%）为阴性对照组，以0.5mg/ml的顺铂为阳性对照组，每组5孔，100μl/孔，继续培养。培养48h后，用MTT比色法检测细胞生长抑制率。即每孔加入MTT溶液20μl（5mg/ml），37℃孵育3h，小心吸去每孔中的培养液，每孔再加入150μl的二甲基亚砜（DMSO），在微型震荡20min，用全自动酶标仪测定各孔OD值。测定波长为550nm。　　2.3统计学处理运用SPSS11.5统计软件，利用单因素方差分

7、析比较差异显著性，所有数据均以±s表示。　　3结果　　3.1含药血清对乳腺癌细胞生长的抑制作用含药血清处理48h，乳腺癌细胞生长受到抑制，其作用随着含药血清浓度的增加而增强。10%，15%和20%含药血清组对细胞的生长抑制明显高于阴性对照组（P＜0.01）及2.5%和5%组，其血清浓度与抑制率呈直线相关。结果见表1。表1西黄丸含药血清对人乳腺癌细胞（MCF7）生长的抑制作用(略)　　3.2含药血清对细胞周期的影响对照组DNA组方图为典型肿瘤细胞G0/1，S，G2/M峰型。15%和20%西黄丸含药血清组处理24h，与阴性对照组比较，G

8、2M期细胞减少、S期细胞比例增加；处理48h，S期细胞减少，G0/1期细胞增多。说明西黄丸含药血清早期主要影响细胞进入G2M期，后期主要使细胞停滞于G0/1期。因此，可以推断其作用机制主要表现在大部分细胞停滞在DNA合成