西黄丸含药血清对人乳腺癌细胞生长的影响论文

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1、西黄丸含药血清对人乳腺癌细胞生长的影响论文【摘要】目的研究西黄丸含药血清对人乳腺癌细胞系（MCF-7）生长及其细胞周期分布的影响。方法应用MTT比色法检测肿瘤细胞活性，流式细胞仪分析细胞周期相对分布。结果西黄丸含药血清对人乳腺癌细胞系（MCF7）有较强的抑制作用，其抑制率与含药血清浓度呈直线相关。流式细胞仪周期分析结果显示含药血清处理24h，S期细胞比例增加，G2/M期细胞减少；处理48h后，G0/1期细胞增多，S期细胞减少。结论西黄丸含药血清可抑制人乳癌细胞系（MCF7）细胞生长，并可干扰其细胞周期。【关键词】西黄丸含药血清人乳腺癌

2、细胞细胞周期TheEffectsofXihuangPillDrugSerumontheGroanBreastCarcinomaCellsAbstract：ObjectiveToinvestigatetheeffectsofXihuangpilldrugserumonthegroorcelletry.ResultsXihuangpilldrugserumhadaninhibitoryeffectontherumorcell,content.Typitalmorphologicalchangesofapoptosisissionelectro

3、nmicroscope.FCMshofor24h,theratioofcellsinSphaseincreased,ent,theratioofcellsinG0/1phaseincreased,andSphasedecreased.ConclusionXihuangpilldrugserumcaninhibitthegroacell(MCF-7)anditscellcycleinvitro.Key；Humanbreastcarcinomacells；Cellcycle西黄丸.freell青霉素、100mg/ml链霉素和10%胎牛血清的1

4、640培养液中，置于含5%CO2，37℃的培养箱中培养。待细胞形成单层，常规消化，收集细胞，0.5%苔盼蓝染色，其细胞活性在98%以上。1.2含药血清的制备西黄丸按2g/kg剂量和10ml/kg给药液体量，将西黄丸用蒸馏水配成相应悬液，以SD大鼠6只，按剂量每天灌胃给药（10ml/kg），连续7d。于末次给药后1h（灌胃前禁食12h），以20%乌拉坦，10ml/kg腹腔注射麻醉，腹主动脉采血，无菌分离血清，经过56℃，30min灭活后，置-80℃冰箱保存备用。1.3试剂、药品、动物1640培养液、胎牛血清、胰蛋白酶购自APerstorpL

5、ifeSciencespany.PI染色剂，购自美国BD公司，MTT及其它常用试剂购自华美公司。CV级SD大鼠，体重180～220g，雌雄各半。购于大连医科大学实验动物中心，许可证号SCXK（辽）20020002。西黄丸，九寨沟天然药业集团有限责任公司生产，批号050601。顺铂，德州德药制药有限公司生产，批号050303。1.4仪器全自动酶标仪，流式细胞仪FACSort，美国BD公司。2方法2.1噻唑蓝还原法（MTT）取处于指数生长期的细胞株配成4×104/ml，加入96孔板，100μl/孔，在37℃，5%CO2条件下培养24h，弃培

6、养液，分别加入2.5%，5%，10%，15%，20%的含药血清，设不含药的血清（血清浓度20%）为阴性对照组，以0.5mg/ml的顺铂为阳性对照组，每组5孔，100μl/孔，继续培养。培养48h后，用MTT比色法检测细胞生长抑制率。即每孔加入MTT溶液20μl（5mg/ml），37℃孵育3h，小心吸去每孔中的培养液，每孔再加入150μl的二甲基亚砜（DMSO），在微型震荡20min，用全自动酶标仪测定各孔OD值。测定波长为550nm。计算公式：肿瘤细胞生长抑制率（%）=（对照组平均OD值给药组测定的平均OD值）/对照组平均OD值×100

7、%。2.2细胞周期时相分析待测细胞样品常规收集细胞，离心，弃上清液，细胞沉淀用PBS冲洗2次，在震荡状态下缓慢滴入75%乙醇2ml左右过夜，再用PBS冲洗，调至终浓度为1ml，加入0.01%的RNA酶10～15μl，37℃水浴30min，加0.25%的PI染色剂（避光）染色30min，作流式细胞仪检测，每份样品随机检测1×105/ml细胞，分析软件为Modfit.2.3统计学处理运用SPSS11.5统计软件，利用单因素方差分析比较差异显著性，所有数据均以±s表示。3结果3.1含药血清对乳腺癌细胞生长的抑制作用含药血清处理48h，乳腺癌细胞

8、生长受到抑制，其作用随着含药血清浓度的增加而增强。10%，15%和20%含药血清组对细胞的生长抑制明显高于阴性对照组（P＜0.01）及2.5%和5%组，其血清浓度与抑制率呈直线相关。结果见表1