西黄丸对人肝癌细胞smmc7721及小鼠宫颈癌细胞u14周期的影响论文

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1、西黄丸对人肝癌细胞SMMC7721及小鼠宫颈癌细胞U14周期的影响论文金沈锐祝彼得秦旭华陈胡兰【摘要】目的研究西黄丸抑瘤作用对肿瘤细胞周期的影响。方法采用体内体外两方面实验进行。体外实验：将西黄丸浸提液加入人原发性肝癌细胞株SMMC7721培养基中，72h后流式细胞术测定SMMC7721细胞的细胞周期；体内实验：连续10d给予移植性U14荷瘤小鼠模型西黄丸，10d后流式细胞术测定U14细胞的细胞周期。结果在体外实验中，西黄丸（200μl/ml）使SMMC7721中G0-G1期细胞比例显著低于肿瘤细胞

2、对照组，G2-M期增多；在体内实验中，西黄丸高剂量组（0.96g/kg）中也导致U14细胞G0-G1期细胞比例显著低于模型组，G2-M期细胞增多。结论体内、体外研究结果显示西黄丸可特异性地将肿瘤细胞阻滞在G2-M期，提示西黄丸可以通过影响肿瘤细胞周期来发挥抑瘤效应。【关键词】西黄丸抗肿瘤细胞周期AbstractObjectiveTostudytheantitumouseffectofXihuangPilloncellcyclesofcancercells.MethodsLeachateofXihua

3、ngpillanmalignanttumorcellstrains（SMMC7721）invitro,after48hoursthecycleoftumorcellsinedbyfloetry.Atthesametime,Xihuangpillor-bearingmice(U14)for10daysinvivo,thecycleofU14cellsinedbyfloetry.ResultsExperimentinvitroshoentinvivoshoorcellsinG2-Mstage.Thisi

4、ndicatesthatXihuangpillcanaffectthecycleofcancercellssoastoblockcancergroouseffect；Cellcycle西黄丸为中药抗癌名方.freell），超声振荡助溶2h，复以4℃下继续浸泡48h后取上清液，用0.22μm微孔滤器过滤后，得到西黄丸低温浸体液。实验时用RPMI-1640培养液稀释至所需浓度使用。1.2试剂RPMIMedium1640培养基Gibco公司，批号1165062；胰蛋白酶（Trypsin，1：250）Ser

5、va公司，批号27043C；RNA酶（RNase）Roche公司，批号90436528；新生小牛血清(Ne,NBS)三利生物制品厂，批号20040101；碘化丙啶（PropidiumIodide,PI）Sigma公司，广州展晨生物科技有限公司进口分装。1.3细胞株人原发性肝癌细胞株SMMC7721，由成都中医药大学病理教研室提供。细胞株用含10%新生小牛血清的RPMI-1640培养基培养，细胞贴壁达80%时传代。1.4动物昆明种小鼠，雌性，18～22g，成都中医药大学实验动物中心提供，批号SCXK（

6、川）2004-11。1.5仪器BeckmanCoulterEpicXL流式细胞分析仪；HeraeusBiofugeStratos低温离心机。2方法2.1体外实验2.1.1分组体外实验分对照组（含人肿瘤细胞）、实验组(含人肿瘤细胞和西黄丸浸提液，设两个浓度100，200μl/ml）。2.1.2方法取对数生长期的SMMC7721，0.25%胰蛋白酶消化，计数细胞，用1640培养基稀释成5×105/ml浓度的单细胞悬液，然后取每孔1000μl，接种到6孔板上，置37℃,5%CO2，饱和湿度的细胞培养箱中，

7、培养6h待细胞贴壁后，设对照组、实验组，均设4复孔。对照组用等体积1640培养液代替受试药物，实验组加入不同浓度的药物，每孔200μl。6孔板置37℃,5%CO2，饱和湿度的细胞培养箱中，培养72h后。弃培养液，收集6孔板内的细胞，PBS洗涤离心后，70%乙醇固定12h，去乙醇，经PBS洗涤2次，加PI染剂混匀，置4℃冰箱避光染色30min后，上机检测细胞周期，每次测定10000个细胞。2.2体内实验2.2.1小鼠移植性恶性肿瘤细胞株小鼠宫颈癌U14由成都中医药大学病理教研室提供。2.2.2小鼠移植

8、性肿瘤的接种与传代根据文献方法［1，2］将液氮冻存昆明小鼠子宫颈癌瘤株进行复苏，经体外培养增殖，生长稳定后以5×106细胞量接种于昆明小鼠腹腔内，待其长出癌性腹水后传代培养至5代，取小鼠无血性的癌性腹水，供接种使用。实验时将第5代的肿瘤小鼠癌性腹水用无菌生理盐水调整细胞数至5×106，接种于昆明种小鼠右侧腋窝皮下（每只皮下注射0.1ml），建立移植性U14荷瘤小鼠模型。2.2.3动物分组实验时取昆明种小鼠30只，按体重分层随机分为3组，每组10只动物，分模型对照组、西