化痰散结方含药血清对人肺癌细胞凋亡相关信号传导的影响

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1、湖北中医学院硕士学位论文化痰散结方含药血清对人肺癌细胞凋亡相关信号传导的影响姓名：黄冬生申请学位级别：硕士专业：中医内科学指导教师：杨勤建;孔庆志2003.6.1中文摘要目的：化痰散结方由马钱子、半夏、天南星、三七等中药组成，是由导师杨勤建在辨证论治理论指导下，根据支气管肺癌多为痰瘀浊气互结的主要病理病机特点，经过多年临床运用优化组方而成，对支气管肺癌有较好的疗效。研究发现：化痰散结方具有诱导肿瘤细胞凋亡的作用。为了进一步了解化痰散结方抗肿瘤的作用分子机制，本实验运用血清药理学的方法，结合现代细胞生物学、现代分子生物学的理论知识和实验技术，在

2、细胞分子水平上，对化痰散结方含药血清诱导人肺癌细胞凋亡的分子机制进行探讨。／方法：①纯种新西兰家兔10只，随机分为给药组和空白组，给药组予以79／kg化痰散结方浸膏灌胃，空白组予以生理盐水3．5ml／kg灌胃，10天后，颈动脉采血，分离血清，灭活，冻藏。②运用高效液相法对化痰散结方中代表性成分马钱子(含士的宁)作含药血清的定性检测。⑦化痰散结方含药血清、不含药兔血清分别与人肺癌细胞SPC．A1共同孵育12小时、24小时、36小时、48小时后，收集细胞，醋酸缓冲液悬浮，反复冻融三次，放射免疫的方法检测人肺癌细胞内cAMP、cGMP的浓度变化。④

3、化痰散结方含药血清、不合药兔血清分别与人肺癌细胞SPC—A1共同孵育12小时、24小时、36小时、48小时后，运用免疫组化的方法检测人肺癌细胞Fas、FasL表达的变化。⑤化痰散结方含药血清、不合药兔血清分别与人肺癌细胞SPC．A1共同孵育12小时、24小时、36小时、48小时后，运用原位杂交的方法检测人肺癌细胞TNFRl表达的变化。结果：①高效液相色谱图显示，士的宁和化痰散结方含药血清的保留时间相近，而-9对照组的保留时间相差较大。②SPC．A1细胞内12h及24h时cAMP、cGMP浓度无明显变化，36h、48h时cAMP浓度升高，eGM

4、P浓度无明显变化，cAMP／cGMP的比值明显升高。③免疫组化方法显示，含药组SPC．A1细胞Fas的表达明显高于对照组(P<0．01)，而对照组SPC．A1细胞FasL的表达明显高于含药组(P<0．05)。④原位杂交方法显示，含药组SPC．A1细胞TNFRl的表达明显高于对照组(P<0．01)。{结论-给药组血清中含有化痰散结方的某些成分。化痰散结方含药血清具有诱导人肺癌细胞凋亡的作用，其作用机制可能-9以下有关：①升高cAMP、cAMP／cGMP的比值。②上调SPC-A1细胞Fas和下调其FasL。③上调SPC．A1细胞TNFRl。主题词

5、：化痰散结肿医药细胞凋亡信号传导血清药理学。人肺癌细胞株，肿瘤Abstractobiective：HuaTanSanJieFangiscomposedofsemenstrychni，panaxnotoginsengsaponins，rhizomapinelliae，rhizomaarisaematis，eta1．Itisbroughtforthbymytutor．．professorYangQinjian，instructedbythetheoryofBianZhengLunZhi，accordingtothemainpathogentica

6、ndpathologicalnatureofbronchogeniccarcinoma--‘‘mutualmassingofphlegmandbloodstasis’’andlongobservationofexperimentandcliniconbronchogeniccarcinoma．Ithasshowngoodeffectsonthetreatmentofbronchogeniccarcinoma．IthasprovedthatthepharmaceuticalserumcontainingHuaTanSanJieFanghasfu

7、nctionofinducingtheapoptosisoflungcancercells．InordertoclarifytheantineoplasticmechanismofHuaTanSanJieFang，weappliestheexperimentalmethodof‘‘serologicalpharmacology’’combinedwiththetheoryandlaboratorytechniqueofmodemcytobiologyandmolecularbiologyinstudyingcomprehensivelythe

8、apoptosisinducedbypharmaceuticalserumcontainingHuaTanSanJieFangonthecellmolecularl