构建人骨保护素在乳腺癌细胞中的表达

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1、编号：200809111刊用形式：论著构建人骨保护素在乳腺癌细胞中的表达张帆1，周艳1，唐鹏1，姜军1（1第三军医大学西南医院乳腺中心，重庆400038）摘要：目的建立过表达人骨保护素（OPG）的MDA-MB-231乳腺癌细胞克隆。方法　从pOTB7-OPG上获得OPG基因片段并用PCR方法扩增，将其连接于真核表达质粒pIRES2-EGFP，酶切鉴定及测序后，转染MDA-MB-231细胞，以G418加压筛选，对转染细胞行单克隆化，稳定转染细胞行RT－PCR和Westernblot检测，确定其OPGmRNA和蛋白表达情况，MTT法检测过表达

2、OPG对MDA-MB-231细胞生长速率的影响。结果成功构建了pIRES2-EGFP-OPG重组质粒；稳定转染细胞的OPGmRNA和蛋白表达均较对照升高；过表达OPG对MDA-MB-231细胞生长速率无明显影响。结论本研究成功建立了过表达OPG的MDA-MB-231细胞克隆，为进一步深入探讨肿瘤细胞自身OPG表达在乳腺癌骨转移发生发展中的作用提供实验基础。关键词：乳腺癌；骨保护素；过表达；MDA-MB-231细胞；pIRES2-EGFP中图法分类号：文献标识码：AHumanosteoprotegerinconstructedandexpr

3、essedinbreastcancercellZHANGFan,ZHOUYan,TANGPeng,JIANGJun(BreastDiseaseCenter,SouthwestHospital,ThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing400038,China)Abstract:ObjectiveToconstructMDA-MB-231breastcancercellclonewithosteoprotegerin(OPG)over-expression.MethodsToconstructthere

4、combinantplasmidpIRES2-EGFP-OPG,fulllengthOPGcDNAwithBglIIandEcoRIamplifiedbyPCRwasdigestedandinsertedintoeukaryoticexpressionplasmidpIRES2-EGFP.Afteridentificationofrestrictionendonucleaseandsequencing,therecombinantplasmidandemptyplasmidweretransfectedintoMDA-MB-231cell

5、sbyLipofectamineTM2000,respectively.ThestablytransfectedclonesafterG418screeningwereidentifiedwithRT－PCRandWesternblot.ThedifferentgrowthratesofMDA-MB-231cellswithOPGover-expressionandnormalexpressionweredetectedbyMTT.ResultsTheeukaryoticexpressionplasmidpIRES2-EGFP-OPGwa

6、sconstructedsuccessfully.OPGmRNAandtheproteinlevelofMDA-MB-231cellclonestablytransfectedwithpIRES2-EGFP-OPGwerehigherthanthoseofthestablytransfectedpIRES2-EGFP.OPGover-expressiondidnotchangethegrowthrateofMDA-MB-231cells.ConclusionThebreastcancercellclonewithOPGover-expre

7、ssionwasconstructedsuccessfullyinourstudy.ThiscanprovidearelatedexperimentalbasisforfurtherexploringtheroleofOPGexpressionbytumorcellitselfinthedevelopmentandprogressionofbreastcancerbonemetastasis.Keywords:breastcancer;osteoprotegerin;over-expression;MDA-MB-231cell;pIRES

8、2-EGFP编号：200809111刊用形式：论著骨保护素（Osteoprotegerin，OPG）是近年发现的肿瘤坏死因子受体超家族成员[1]，是调控破骨细胞活化的关键因素，在乳腺癌骨转移发