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《人肿瘤抑素慢病毒表达载体在肝癌细胞中的表达》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。
1、第21卷第2期江苏大学学报(医学版)Vo.l21No.22011年3月JournalofJiangsuUniversity(MedicineEdition)Mar.2011人肿瘤抑素慢病毒表达载体在肝癌细胞中的表达11211朱月蓉,王冰,李增才,何玉杰,邱红(解放军第八一医院1.生化科;2.肝脏移植中心,江苏南京210002)[摘要]目的:观察人肿瘤抑素(tumstatin)对血管生成的抑制作用,探讨肿瘤抑素在肝癌基因治疗中的应用前景。方法:构建人肿瘤抑素慢病毒表达载体pLent-iTum,经2
2、93T细胞包装,收集病毒上清液,感染肝癌细胞株SMCC-7721,收集各组细胞的条件培养基,通过蛋白质印迹分析各组细胞肿瘤抑素的表达情况,并通过人脐静脉血管内皮细胞增殖抑制及迁移试验研究其体外生物学活性。结果:限制性内切酶酶切分析和测序结果均表明成功构建了肿瘤抑素慢病毒表达载体,以293T细胞包装的重组慢病毒能够高效感染肝癌细胞,肝癌细胞感染重组慢病毒后可高效表达肿瘤抑素并分泌到培养上清液中。体外研究结果表明,重组肿瘤抑素可明显抑制人脐静脉血管内皮细胞增殖及迁移,抑制率分别达35%和41%,与空
3、白对照组相比,差异有统计学意义(P值均<0.01)。结论:肿瘤抑素慢病毒表达载体在SMCC-7721细胞中能获得稳定表达,并且重组肿瘤抑素能有效遏制肿瘤的血管生成。[关键词]肿瘤抑素;肝癌;血管生成[中图分类号]R735.7[文献标志码]A[文章编号]1671-7783(2011)02-0122-05Expressionofhumantumstatininheptocarcinomacellandidentificationofitsbiologicalfuntions11211ZHUYue-r
4、ong,WANGBing,LIZeng-cai,HEYu-jie,QIUHong(1.DepartmentofBiochemistry;2.LiverTransplantationCenter,the81stHospitalofPLA,NanjingJiangsu210002,China)[Abstract]Objective:Toevaluatetheantiangiogenicpropertyofvascularendothelialcellinheptocarc-inomacellline
5、sandexploreitspossibleapplicationinthegenetherapyofhumanhepatocellularcarcinoma(HCC).Methods:Thegeneencodingtumstatinwassubclonedintolentiviralvectortogeneratetherecom-binantvectorpLent-iTum.ThevectorpLent-iTumandotherpackagingvectorwerecontransfecte
6、dto293Tcellsbycalciumphosphate.ThenSMCC-7721wasinfectedwithrecombinantlentivirusandtheexpressionefficiencyoftumstatinwasanalyzedbywesternblo.tProliferationandmigrationassayofhumanumbilicalveinendothelialcells(HUVEC)wasusedtoevaluatethebiologicalactiv
7、ityoftumstatininvitro.Results:RestrictionenzymedigestionandDNAsequencingdemonstratedthattherecombinantplasmidPlent-iTumwasconstracted.SMCC-7721secretedtumstatininthemediaeffectivelyafterinfectedwiththerecombinantlentivirusandthisproteinexhibitedstron
8、ginhibitoryeffectsonproliferationandmirgrationofHUVEC(P<0.01).Conclusion:SMCC-7721secretedtumstatineffectivelyafterinfectedwithrecombinantlentivirusandthisrecombinanttumstatinmayexertinhibitoryontumorantiangiogenic.[Keywords]tumstatin;hepatocellularc
