lif基因慢病毒载体构建及其在人脂肪间充质干细胞的表达

《lif基因慢病毒载体构建及其在人脂肪间充质干细胞的表达》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、万方数据温州医科大学硕士学位论文论文题目：L至曼基国墁疸耋亟签构建区墓垄△旦旨堕阊左厦王细胞鳆麦达答辩委员会主席：答辩委员会成员：堕堂堂医一盔大一中一型型直医医划划剑量量遏平一东一一建一卫一荬一万方数据温州医科大学硕士学位论文目录英文缩略词表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．4英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．6J^：=日U吾⋯．⋯．⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯．⋯．．．⋯．⋯⋯．⋯⋯．⋯．．⋯⋯．⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯．．8第一部分人脂肪间充质干细胞的分离培养、鉴定、冻存材料与方法⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．11结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．。14；口木⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·叶讨{仑⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．17第二部分慢病毒介导LIF基因转染人脂肪间充质干细胞材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．19结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯”OU；口术⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··讨j沦⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．35参考

3、文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯37个人信息⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一40j改谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．41综述及参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯42学位论文独创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．492万方数据温州医科大学硕士学位论文英文缩略词表(abbreviation)英文缩写英文全称ASCshASCsMSEAEPBMCSLIFPBSRealtimeIU’-PCRFBSCNSBMSCsR理lASDS．PAGEMSCsPMSFPVDF中文名称Adiposestemcel

4、ls脂肪干细胞Humanadiposestemcells人脂肪间充质干细胞Multiplesclerosis多发性硬化Experimentalautoimmune实验性自身免疫性脑脊encephalomyelitis髓炎Peripheralbloodmononuclearcells外周血单个核细胞Leukemiainhibitoryfactor白血病抑制因子Phosphoratebuffersolution磷酸缓冲液Realtimereversetranscriptionpolymerase实时荧光逆转录-聚合chainreaction酶链反应Fetalcalfserum胎牛

5、血清Centralnervoussystem中枢神经系统Bonemarrowmesenchymastemcells骨髓间充质干细胞Radioimmunoprecipitationassay组织细胞裂解液Sodiumdodecylsulfate．PolyacrylamidegelSDS一聚丙烯酰胺凝胶电electrophoresis泳Mesenchymalstemcells，间充质干细胞Phenylmethanesulfonylfluoride苯甲基磺酰氟Polyvinylidenefluoride聚偏氧乙烯3万方数据温州医科大学硕士学位论文LIF基因慢病毒载体构建及其在人脂肪

6、间充质干细胞的表达中文摘要目的：1、建立人脂肪间充质干细胞(HumanAdiposeStemCells，hASCs)的分离、培养、鉴定及冻存、复苏的方法，获得大量高纯度的hASCs，为后续的研究奠定坚实的基础。2、构建LIF慢病毒载体，转染人脂肪间充质干细胞，获得高表达LIF的人脂肪间充质干细胞。方法：1、从抽脂手术患者中得到脂肪组织，I型胶原酶消化分离得到hASCs，接种于含10％FBS的DMEM培养基中培养，并且传代扩增，取第3代生长对数期的细胞，在液氮中冻存6个月后复苏，台盼蓝染色检测细胞存活率，MTT法描绘细胞生长曲线，流式细胞仪检测冻存前后细胞表面分子CD44、CD

7、l05、CD29、CD73、CD31、HLA-DR的表达水平。2、PCR扩增得到LIF基因序列，采用质粒重组技术获得载有LIF基因的重组质粒，重组质粒包装慢病毒，将慢病毒转染人脂肪间充质干细胞后，通过荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达，采用流式细胞技术检测慢病毒转染率，RT—PCR及Westernblot技术检测LIF的表达水平。结果：1、在倒置显微镜下，hASCs大小均一，呈长梭形编织状。复苏后，hASCs存活率可达到(91．25±3．02)％；冻存前后hASCs生长曲线无显著差异，均为“S”形曲线；经