资源描述：
《pdgf-a基因逆转录病毒载体的构建及其在猪骨髓间充质干细胞中表达的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、PDGF-A基因逆转录病毒载体的构建及其在猪骨髓间充质干细胞中表达的研究闫国和1，杨余亮2，侯爱莲3，艾国平1，王锋超1，许庆娥4，程天民1，王军平1，粟永萍1（1第三军医大学预防医学院全军复合伤研究所，创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室，重庆400038；2四川省古蔺县人民医院普外科，四川古蔺646500；3重庆医科大学生理学教研室重庆400016；3解放军71613部队医院，山东海阳265100）摘要：目的克隆血小板衍生生长因子A链(Platelet-derivedgrowthfactorAchain，PDGF-A)基因,以逆转录病毒载体pLXSN为骨架携带PDG
2、F-A基因转染猪骨髓间充质干细胞(bonemarrow-drivedmesenchymalstemcells,bMSCs)，为应用PDGF-A基因修饰bMSCs进行创面修复奠定基础。方法采用RT-PCR二步分离法,以人肝癌细胞总RNA为模板,扩增PDGF-A基因的全长cDNA编码序列,构建PDGF-A基因的逆转录病毒载体pLXSN/PDGF-A，并将其导入病毒包装细胞PA317中，经G418筛选并扩增，以病毒液感染NIH3T3细胞，选出抗性克隆，测其病毒滴度，将高滴度病毒液感染bMSCs。采用RT-PCR、Southernblot和ELISA法，分别检测PDGF-A
3、基因转染bMSCs的效率及PDGF-A在bMSCs中的表达水平；光镜、MTT法、成骨与成脂诱导分别检测bMSCs转染PDGF-A基因后的生长状态、增殖情况及干细胞特性。结果经测序验证，克隆到PDGF-A基因的全长cDNA序列与GenBank所报告的该基因序列完全一致。成功构建了PDGF-A链基因的逆转录病毒载体pLXSN/PDGF-A，并实现了PDGF-A基因在bMSCs的稳定表达。bMSCs转染PDGF-A后的生长状态、增殖情况良好，且仍具干细胞特性。结论成功地将PDGF-A基因克隆到pLXSN载体中,并实现了PDGF-A基因在bMSCs中的稳定表达。bMSCs转
4、染PDGF-A后仍具干细胞特性。关键词：逆转录病毒载体；血小板衍生生长因子A链基因；骨髓间充质干细胞；稳定表达中图法分类号：文献标识码：ACloningandexpressionofplatelet-derivedgrowthfactorAchaininporcinemarrowmesenchymalstemcellsmediatedbyretroviralvectortransfectionYANGuo-he1,YANGYu-liang2,WangJun-ping1,AIGuo-ping1,WANGFeng-chao1,XUQing-er3,CHENGTian-m
5、in1,SUYong-ping1（StateKeyLaboratoryofTrauma,BurnsandCombinedInjury,InstituteofCombinedInjury,CollegeofPreventiveMedicine,ThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing400038；2DepartmentofgeneralsurgeryofPeople’shospitalofGulingcountyofSichuanprovince,Guling646505;3DepartmentofPhysiology,Chon
6、gqingUniversityofMedicalScience,Chongqing400016,China;4the71613hospitalofChinesePLAofShandongprovince,Haiyang2651005,China）Abstract：ObjectiveTocloneplatelet-derivedgrowthfactorAchain(PDGF-A)geneandobtainpLXSN-PDGF-Atransfectedporcinemarrowmesenchymalstemcells(bMSCs).MethodscDNAfragment
7、encodinghumanPDGF-Agenewereamplifiedbyreversetranscriptase-polymerasechainreaction(RT-PCR)usingthemRNAisolatedfromahumanhepatomacelllineastemplate.ThePCRamplifiedfragmentof基金项目：国家重点基础研究发展计划（973计划）（2005CB522605）；国家自然科学基金（30200142）；全军医学科研“十一五”科技攻关项目（06G076）SupportedbytheNationalBasicRe
