慢病毒载体介导hbfgf基因修饰骨髓间充质干细胞治疗肢体缺血实验的研究

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1、2万方数据目录CONTENTS主要英文缩略索引(MainEnglishabbreviationindex)……………………………1中文摘要(Chineseabstract)………………………………………………………2英文摘要(Englishabstract)…………………………………………………………4论文正文(Text)引言(Introdction)………………………………………………………………6材料与方法(Materialsandmethods)…………………………………………8结果(Results

2、)…………………………………………………………………15讨论(Discussion)………………………………………………………………23结论(Conclusions)……………………………………………………………30参考文献(References)…………………………………………………………31致谢(Acknowledgements)…………………………………………………………35综述(Review)………………………………………………………………………36综述参考文献(Referencesofthere

3、view)…………………………………………413万方数据主要英文缩略索引(MainEnglishabbreviationindex)缩写英文中文BMSCBonemarrowstemcell骨髓间充质干细胞dday天DMEMDulbecco’sminimumessentialmediumDulbecco极限必须培养基GFPGreengluorescentprotein绿色荧光蛋白hhour小时hbFGFHumenbasicfibroblastfactor人源性碱性成纤维生长因子minminute分钟PADp

4、eripheralarterialdisease外周动脉疾病PAGEpolyacrylamidegelelectrophoresis聚丙烯酰胺凝胶电泳PBSPhosphate-bufferedasline磷酸盐缓冲液VEGFvascularendothelialgrowthfactor血管内皮生长因子1万方数据慢病毒载体介导的hbFGF基因修饰骨髓间充质干细胞治疗肢体缺血的实验研究摘要目的探讨以慢病毒为载体介导人碱性成纤维生长因子（humanbasicfibroblastgrowthfactor,hbFG

5、F）基因修饰骨髓间充质干细胞（bonemarrowstemcell,BMSC）治疗肢体缺血的可行性。方法1、采用密度梯度离心方法获取SD(SpragueDawley)大鼠BMSC，用含有10%胎牛血清的DMEM(Dulbecco’sModifiedEagleMedium)作为培养基，获取第3—5代BMSC。2、以慢病毒构建人碱性成纤维生长因子基因载体，转染大鼠BMSC，获取人碱性成纤维生长因子基因修饰BMSC。3、24只SD大鼠均切除右侧股动脉及其分支，形成后肢缺血模型鼠。成模后随机分为4组（每组6只）：

6、bFGF-BMSC组，缺血后肢肌内多点注射bFGF基因修饰的BMSCs；GFP-BMSC组，缺血后肢肌内多点注射携带绿色荧光蛋白（greenfluorescentprotein，GFP）空载病毒转染的BMSCs;BMSC组，缺血后肢肌内多点注射普通BMSCs；PBS组，肌内注射与前者等体积的磷酸盐缓冲液（phosphatebuffersaline，PBS）。4、细胞移植4周后，取内收肌和腓肠肌组织，一部分用于冰冻切片，记数微血管密度并观察移植细胞的改变；另一部分用于westernblot实验，检测bFGF

7、、VEGF等在动物体内的表达。结果1、通过密度梯度离心方法，可获得相对纯化的BMSC。2、BMSCs接受慢病毒转染2d后，在荧光显微镜下观察到强烈的绿色荧光。3、细胞移植2周后，受体动物体内可见绿色荧光阳性细胞，其中GFP-BMSC+组，GFP细胞数（15.4±3.85）个/视野低于bFGF-BMSC组（26.6±3.51）个/视野（t=4.811，P=0.001）2万方数据++4、干细胞在体内分化为血管内皮细胞，但是GFP-BMSC组的GFPCD31细胞数（7.0±2.12）/视野低于bFGF-BMSC

8、组（14.0±1.58）/视野（t=5.916，P=0.000）。5、BMSC组微血管密度为（24.0±4.3）/视野，明显高于PBS组（8.8±4.5）/视野（t=2.65，P=0.017）；GFP-BMSC组（28.6±4.2）/视野，与BMSC组无差异（t=0.8，P=0.434）；bFGF-BMSC组（55.0±16.5）/视野，高于BMSC组（t=5.4，P=0.000）6、实验动物接受细胞移植2周后，在bFGF-B