hil-37基因修饰的骨髓间充质干细胞对哮喘治疗作用的研究

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1、分类号：密级：UDC：学号：406520512400南昌大学硕士研究生学位论文hIL-37基因修饰的骨髓间充质干细胞对哮喘治疗作用的研究researchofhIL-37geneticmodificationofbonemarrowmesenchymalstemcellsforthetreatmentofasthma余刚培养单位（院、系）：南昌大学第二附属医院指导教师姓名、职称：徐国纲副教授申请学位的学科门类：医学学科专业名称：内科学（呼吸病学）论文答辩日期：2015年5月答辩委员会主席：傅颖媛评阅人：许飞孙坚2

2、015年5月学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南昌大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名（手写）：签字日期：2015年6月9日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校有权保留并向国家有关部门或机构送交

3、论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南昌大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编本学位论文。同时授权北京万方数据股份有限公司和中国学术期刊（光盘版）电子杂志社将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》中全文发表，并通过网络向社会公众提供信息服务，同意按“章程”规定享受相关权益。学位论文作者签名（手写）：导师签名（手写）：签字日期：2015年6月9日签字日期：2015年6月9日论文题目hIL-37

4、基因修饰的骨髓间充质干细胞对哮喘治疗作用的研究姓名余刚学号406520512400论文级别博士□硕士□院/系/所南昌大学医学院专业内科学E_mail备注：□公开□保密（向校学位办申请获批准为“保密”，年月后公开）I摘要摘要背景：全球有几亿人正遭受着哮喘的折磨，就本质而言哮喘是由多种炎症因子参与的呼吸道炎症。IL-37是IL-1家族的一员，在既往的研究中人们已经证实IL-37是一种很强的抑炎因子。Chris用IL-37转基因小鼠建立肠炎模型时发现IL-37转基因小鼠肠道病情更轻，David用IL-37干预肝炎时也

5、发现IL-37可以有效的缓解病情，他们的研究结果充分的证明了IL-37对炎症性疾病有很好的治疗效果。IL-37因子比较昂贵且半衰期短，这让它很难直接应用于动物实验研究，在动物实验研究时必须找到一个理想的基因表达载体来分泌IL-37，MSC就是这样一种理想的基因表达载体。MSC作为基因表达载体可以高效的表达目的基因且具有向炎症部位定向归巢的作用。我们是否可以用IL-37基因修饰的MSC用于哮喘的治疗了？这个科学问题的提出和解决将为临床上哮喘的治疗提供一种新的方案。目的：研究IL-37对哮喘气道炎症的抑制作用，并探

6、索其相关的机制。方法：体外分离培养与提纯小鼠MSC。Ad-IL-37转染MSC后用ELISA和Western检测转染Ad-IL-37后的MSC分泌IL-37的情况。建立小鼠哮喘治疗模型，通过检测血中的lgElgG1浓度，肺泡灌洗液中IL-4IL-5IL-13浓度及细胞总数评价小鼠气道炎症程度。体外验证IL-37对DC的影响：实验组用LPS+IL-37处理DC24小时候，对照组用LPS处理DC24小时，24小时后用ELISA检测DC分泌细胞因子的情况。体外验证IL-37对OT1OT2T细胞增殖的影响，磁珠分选DC

7、然后用相应的肽段OVA处理2小时，时间到后加入CFSE标记的OT1或OT2T细胞，实验组加入IL-37三天后收集细胞进行流式分析。体外验证IL-37对惰性T细胞分化成Treg的影响，用Anti-CD3抗体刺激惰性T细胞，实验组加入IL-37+IL-2+TGF-beta对照组加入IL-2+TGF-beta五天后用流式分析结果。体外验证IL-37对Treg增殖的影响，分选出Treg染上CFSE加入一定数量的DC，实验组加入IL-37+IL-2，对照组加入IL-2，五天后流式分析。结果：通过CD45、CD11b双阴选

8、得到纯度为90%MSC符合后续实验的要求。Ad-IL-37腺病毒成功转染MSC。ELISA及Western结果显示Ad-IL37转染后的MSC可以高效的表达IL-37。IL-37小鼠哮喘治疗模型中ELISA结果显II摘要示IL-37治疗组小鼠肺泡灌洗液中IL-4、IL-5、IL-13促炎因子浓度下降，血清中OVA-lgG1、lgE含量降低。体外实验证明IL-37抑制DC的活化，抑制OT