过表达人骨保护素的乳腺癌细胞克隆的构建

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1、过表达人骨保护素的乳腺癌细胞克隆的构建建议修改张帆周艳唐鹏姜军第三军医大学西南医院乳腺中心，重庆400038摘要：目的建立过表达人骨保护素（Osteoprotegerin，OPG）的MDA-MB-231乳腺癌细胞克隆。方法　从pOTB7-OPG上获得OPG基因片段并用PCR方法扩增，将其连接于真核表达质粒pIRES2-EGFP，酶切鉴定及测序后，转染MDA-MB-231细胞，以G418加压筛选，对转染细胞行单克隆化，稳定转染细胞行RT－PCR和Westernblot检测，确定其OPGmRNA和蛋白表达情况，MTT法检测过表

2、达OPG对MDA-MB-231细胞生长速率的影响。结果成功构建了pIRES2-EGFP-OPG重组质粒；稳定转染细胞的OPGmRNA和蛋白表达均较对照升高；过表达OPG对MDA-MB-231细胞生长速率无明显影响。结论本研究成功建立了过表达OPG的MDA-MB-231细胞克隆，为进一步深入探讨肿瘤细胞自身OPG表达在乳腺癌骨转移发生发展中的作用提供相关实验基础。关键词：乳腺癌；骨保护素；过表达；MDA-MB-231细胞；pIRES2-EGFPConstructionbreastcancercellclonewithoste

3、oprotegerinover-expressionZHANGFan,ZHOUYan,TANGPeng,JIANGJun(BreastDiseaseCenter,SouthwestHospital,ThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing400038,China)Abstract:ObjectiveToconstructMDA-MB-231breastcancercellclonewithosteoprotegerin(OPG)over-expression.Methods:Toco

4、nstructtherecombinantplasmidpIRES2-EGFP-OPG,fulllengthOPGcDNAwithBglIIandEcoRIamplifiedbyPCRwasdigestedandinsertedintoeukaryoticexpressionplasmidpIRES2-EGFP.Afteridentificationofrestrictionendonucleaseandsequencing,therecombinantplasmidandemptyplasmidweretransfect

5、edintoMDA-MB-231cellsbyLipofectamineTM2000,respectively.ThestablytransfectedclonesafterG418screeningwereidentifiedwithRT－PCRandWesternblot.ThedifferentgrowthratesofMDA-MB-231cellswithOPGover-expressionandnormalexpressionweredetectedbyMTT.Results:Theeukaryoticexpre

6、ssionplasmidpIRES2-EGFPwasconstructedsuccessfully.OPGmRNAandtheproteinlevelofMDA-MB-231cellclonestablytransfectedwithpIRES2-EGFP-OPGwerehigherthanthoseofthestablytransfectedpIRES2-EGFP.OPGover-expressiondidnotchangethegrowthrateofMDA-MB-231cells.ConclusionThebreas

7、tcancercellclonewithOPGover-expressionwasconstructedsuccessfullyinourstudy.ThiscanprovidearelatedexperimentalbasisforfurtherexploringtheroleofOPGexpressionbytumorcellitselfinthedevelopmentandprogressionofbreastcancerbonemetastasis.Keywords:breastcancer;osteoproteg

8、erin;over-expression;MDA-MB-231cell;pIRES2-EGFP基金项目：国家自然科学基金（30700814）；第三军医大学2006年度中青年科研基金（编号？）SupportedbytheNationalNaturalScienceFoundationofChina(307