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时间:2018-12-05
《SYBR实时荧光定量PCR检测人乳腺癌细胞》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、SYBR实时荧光定量PCR检测人乳腺癌细胞AnnexinⅡmRNA方法的建立及应用郭变琴,黄学梅,吴立翔Δ(重庆市肿瘤研究所检验科;重庆400032)摘要目的建立检测人AnnexinⅡmRNA含量的SYBR实时荧光定量PCR方法,并用其测定人乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7中AnnexinⅡmRNA水平。方法根据人AnnexinIImRNA的保守序列设计特异性引物,提取人乳腺癌细胞总RNA,并逆转录为cDNA,胶回收纯化PCR产物,并与pGM-T载体连接构建质粒标准品,进一步通过SYBR实时荧光定量PCR检测人乳腺癌细胞中AnnexinⅡ
2、mRNA水平。结果该方法标准曲线的r2为0.997,融解曲线分析显示单个峰,pGM-TAnnexinII质粒标准品高、低拷贝数的批内、批间变异系数分别为6.2%,7.8%和9.1%和12.3%。进一步的研究表明人乳腺癌细胞MDA-MB-231中AnnexinⅡmRNA显著高于MCF-7(P<0.01)。结论建立的检测人AnnexinIImRNA的SYBR实时荧光定量PCR方法灵敏、特异且重复性好,并可用于乳腺癌细胞中AnnexinⅡmRNA的定量。关键词:AnnexinⅡ;SYBR实时荧光定量PCR;乳腺癌细胞[中图分类号]R737-9[文献标识码
3、]ATheestablishmentandapplicationofaSYBRrealtimefluorescencequantitativePCRfordetectionAnnexinIImRNAofhumanbreastcancercellsGUOBianqin,HUANGXuemei,WULixiang(ChongqingCancerInstitute,Chongqing400032)Abstract:ObjectiveToestablishaSYBRbasedrealtimefluorescencequantitativePCRmethod
4、fordetectionhumanAnnexinIImRNAexpression;anddetectAnnexinIImRNAinhumanbreastcancercells(MCF-7,MDA-MB-231.MethodsThespecificprimersweredesignedaccordingtotheconservedsequenceofhumanAnnexinIIgene.TotalRNAswereextractedfromhumanbreastcancercells(MCF-7,MDA-MB-231),thentheRNAsweret
5、ranscribedreversely*基金项目:重庆市自然科学基金(csic,2006BB5427)。作者简介:郭变琴,女(1979-),主管检验师,硕士,主要从事乳腺癌方面的研究。电话:13512388623E-mail:178098941@qq.com。Δ通信作者:电话:(023)65330078,E-mail:WLX124610@yahoo.com.cn。intocDNAs.Theplasmidstandardswereconstructed.Thesensitivityandspecificityofthemethodwereevalua
6、ted.TherelativeexpressionlevelsofhumanAnnexinIImRNAinhumanbreastcancercellsweredetectedbythismethod.ResultsThesquaredofcorrelationcoefficientofthestandardcurveofthismethodwas0.997,meltingcurveanalysisshowedsinglepeak.TherelativeexpressionlevelsofhumanAnnexinIImRNAinMDA-MB-231w
7、erehigherthanMCF-7(P<0.01).ConclusionsThemethodtodetectAnnexinIIbyrealtimefluorescencequantitativePCRwasgoodinsensitivity,specificityandlinearfunction.ItcanbeusedasastandardmethodofqRTPCRfordetectionofhumanAnnexinIIexpression.【Keywords】:AnnexinⅡ;SYBRrealtimefluorescencequantit
8、ativePCR;breastcancercellsAnnexinⅡ最早是作为Rous肉瘤病毒转化基因的酪氨酸激酶底物于1
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