乳腺癌细胞培养.doc

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1、MCF-7是一种很好养的人乳腺癌细胞，培养基用DMEM或RPMI1640均可，10－15％的小牛血清就能长得很好。一般两到三天传一代。传代也很常规。吸出培养基，加入0.25％的胰酶1ml，轻轻晃动培养瓶，使胰酶流遍瓶壁，以去除残余的培养基。再加入2ml胰酶（25ml培养瓶）静置消化2－5min，待细胞缩起变圆，将胰酶吸出加入培养基3ml吹打成单细胞悬液分瓶即可。我一般都不用缓冲液冲洗，而直接用胰酶冲洗一下以去除剩余血清的作用，感觉效果还不错。因为MCF-7消化较快，一般不放到培养箱中消化，以免消化太过。需要注意的是M

2、CF-7生长较快如不及时传代可出现整瓶细胞浮起，一般都来不及抢救。MDA-MB-231人乳腺癌细胞细胞中文名称人乳腺癌细胞细胞英文名称MDA-MB-231物种人细胞形态特征上皮样细胞生长特性贴壁生长细胞特种特性MDA-MB-231是从一名51岁的白人女性乳腺癌患者的胸水中分离建立的。该细胞表达表皮生长因子EGF受体、TGF-α受体和WNT7B癌基因培养基L15:LeibovitzMedium血清10%FBS细胞传代方法1:2~1:4传代；每周2~3次细胞传代情况C5细胞冻存条件MDA-MB-231人乳腺癌细胞基础培养

3、基+5%DMSO+20%FBS支原体检测阴性说明培养基：DMEM90%,FetalBovineSerum10%培养条件：37℃5%CO2消化条件：0.25%(w/v)Trypsin-0.53mMEDTA溶液，消化5-10min传代的比例：1：2~1：4换液时间：2~3天换液一次冻存液比例：85%培养基，10%FBS,5%(v/v)DMSO冻存密度：1-2×106/管，液氮保存MDA-MB-231人乳腺癌细胞复苏方法：取出冻存管后，投入37 ℃水浴中，震荡解冻2 min，酒精消毒管壁外侧后，将其转入超净台中，将管内细胞

4、转移至离心管中，加入5 ml 37 ℃预热的培养基，并清洗冻存管一次，将离心管离心（1000 rpm，5 min），弃去上清液，再加入2 ml培养基，转入培养瓶中培养。产品名称：人正常乳腺细胞 Hs578Bst规格：70%密度的25cm2培养瓶的细胞一瓶特点：细胞代数为4-5代左右包装：内层无菌自封袋；专用防压泡沫盒；外层防压保温气泡袋；说明书细胞来源：ATCC、sciencell、ICLC货期：1-2周运输方式：快递运输售后：收到细胞后7天，如发现细胞有质量问题（如污染，死亡，快递运输等原因）时，应出具书面质量问题

5、报告并及时传真或E-mail致销售人员，我们将尽快为您解决。细胞培养常见问题分析细胞培养1、冷冻管应如何解冻？取出冷冻管后，须立即放入37℃水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化，并注意水面不可超过冷冻管盖沿，否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时，必须注意安全，预防冷冻管之爆裂。2、细胞冷冻管解冻培养时，是否应马上去除DMSO？除少数特别注明对DMSO敏感之细胞外，绝大部分细胞株（包括悬浮性细胞），在解冻之后，应直接放入含有10-15ml新鲜培养基之培养角瓶中，待隔天再置换新鲜培养基以去除DMS

6、O即可，如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附之问题。3、可否使用与原先培养条件不同之培养基？不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基，若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基，细胞大都无法立即适应，造成细胞无法存活。4、可否使用与原先培养条件不同之血清种类？不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。5、何谓FBS,FCS,CS,HS?FBS（fetal

7、bovineserum）和FCS（fetalcalfserum）是相同的意思，两者都是指胎牛血清，FCS乃错误的使用字眼，请不要再使用。CS（calfserum）则是指小牛血清。HS（horseserum）则是指马血清。6、培养细胞时应使用5%或10%CO2？或根本没有影响？一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作为pH的缓冲系统，而培养基中NaHCO3的含量将决定细胞培养时应使用的CO2浓度。当培养基中NaHCO3含量为每公升3.7g时，细胞培养时应使用10%CO2；当培养基中NaHCO3为每公升1.5g

8、时，则应使用5%CO2培养细胞。7、何时须更换培养基？视细胞生长密度而定，或遵照细胞株基本数据上之更换时间，按时更换培养基即可。8、培养基中是否须添加抗生素？除于特殊筛选系统中外，一般正常培养状态下，培养基中不应添加任何抗生素。9、附着性细胞继代时所使用之trypsin-EDTA浓度？应如何处理？一般使用之trypsin-EDTA浓度为0.05