资源描述:
《白杨素对人胃癌sgc7901细胞增殖与凋亡的影响论文》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、白杨素对人胃癌SGC7901细胞增殖与凋亡的影响论文康颖,刘红光,曾谷清,谷依学【摘要】目的探讨白杨素(Chrysin,ChR)诱导人胃癌SGC7901细胞株凋亡的作用及机制。方法分别用10、20、40、80μM的ChR处理人胃癌细胞株SGC790148h,采用MTT比色法检测ChR对SGC7901细胞的增殖抑制效应;采用丫啶橙(AO)染色、流式细胞术检测ChR诱导SGC7901细胞凋亡的发生;应用TT比色法显示的10~80μM的ChR在体外对人胃癌SGC7901细胞有增殖抑制率为:9.71%~53.64%,该作用呈浓度依赖性;AO染色荧光显微镜观察ChR在体外能诱导人
2、胃癌SGC7901细胞发生凋亡.freelechanismofChrysinongastriccancercells(SGC7901).MethodsThecellsofhumangastriccancercelllineSGC7901easuredbyMTTassay.Acridineorange(AO)stainingandfloetry(FCM)iquantificationofproteinexpressionageanalysis.ResultsSO)溶解配成1mmol/L母液,闭光保存于4℃冰箱中,临用时将此母液稀释至所需浓度。兔抗人Bcl2、Bax、NF
3、κBp65多克隆抗体购于北京中杉金桥生物技术有限公司,相应二抗和化学发光试剂,均购自NEB公司。MTT、DMSO、AO均购自美国Amresco公司。1.2细胞培养人胃癌细胞株SGC7901从中南大学湘雅医学院肿瘤研究所引进,培养于含10%灭活小牛血清,100U/ml青霉素,100μg/ml链霉素的RPMI1640培养液中,在37℃,饱和湿度,5%CO2培养箱培养,每2~3天传代。1.3增殖抑制率检测SGC7901细胞以3×104/ml的浓度接种于96孔板,每孔加入180μl,待细胞贴壁后加20μl不同浓度ChR,使其终浓度分别为10、20、40、80μM,溶媒对照组加入相同体
4、积含终浓度为0.1%DMSO的完全培养基,每组设6个复孔,处理48h后加入MTT测吸光度值A,计算增殖抑制率,增殖抑制率(%)=(1-实验组A均值/对照组A均值)×100%,实验重复3次。1.4细胞凋亡检测细胞以3×105/瓶接种,24h后换液同步化,24h后分别用终浓度为10、20、40、80μM的ChR、0.1%的DMSO完全培养基处理48h后,收集细胞,实验重复3次。(1)丫啶橙(AO)染色:以PBS悬浮细胞团,调整细胞浓度为1×106,取出95μl细胞悬液与5μl丫啶橙(100μg/ml)混匀后,涂片后镜检拍照。(2)流式细胞术:预冷的PBS洗涤细胞,用4℃的70%乙醇固定
5、24h后,2000r/min离心,以PBS洗1次,重悬于PBS中加入0.5ml经高温处理的无DNA酶活性的RNaseA,使终浓度为500μg/ml,再加入1ml碘化丙啶PI(100μg/ml),轻轻混匀,于室温暗处作用15min后,上机检测。1.5,CasaliP.InhibitionofFasmediatedapoptosisbyantigen:implicationsforlymphomagenesisJ.Autoimmunity,2002,35(4):283289.4SherrCJ.ThePezcollerLecture:cancercellcyclerevisitedJ
6、.CancerRes,2000,60(14):3689.5SunSC,XiaoG.DeregulationofNFkappaBanditsupstreamkinasesincancerJ.CancerMetastasisRev,2003,22(4):405422.6KarinM,CaoY,GretenFR,etal.NFkappaBincancer:frominnocentbystandertomajorculpritJ.NatRevCancer,2002,2(4):301310.7MayoM.Regula,KarenEns,LorrieA,Kirshenbaum.IKKβ
7、IsrequiredforNFкBmediatedBcl2activationinventricularmyocytesJ.BiolChem,2002,10(4):10741076.9MatsushitaH,MorishitaR,NataT,etal.HypoxiainducedendothelialapoptosisthroughnuclearfactorkB(NFκB)mediatedbcl2suppressionJ.CirculationResea