白杨素对人胃癌sgc7901细胞增殖与凋亡的影响论文

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1、白杨素对人胃癌SGC7901细胞增殖与凋亡的影响论文康颖，刘红光，曾谷清，谷依学【摘要】目的探讨白杨素（Chrysin，ChR）诱导人胃癌SGC7901细胞株凋亡的作用及机制。方法分别用10、20、40、80μM的ChR处理人胃癌细胞株SGC790148h，采用MTT比色法检测ChR对SGC7901细胞的增殖抑制效应；采用丫啶橙（AO）染色、流式细胞术检测ChR诱导SGC7901细胞凋亡的发生；应用TT比色法显示的10~80μM的ChR在体外对人胃癌SGC7901细胞有增殖抑制率为：9.71%~53.64%，该作用呈浓度依赖性；AO染色荧光显微镜观察ChR在体外能诱导人

2、胃癌SGC7901细胞发生凋亡.freelechanismofChrysinongastriccancercells(SGC7901).MethodsThecellsofhumangastriccancercelllineSGC7901easuredbyMTTassay.Acridineorange(AO)stainingandfloetry(FCM)iquantificationofproteinexpressionageanalysis.ResultsSO）溶解配成1mmol/L母液，闭光保存于4℃冰箱中，临用时将此母液稀释至所需浓度。兔抗人Bcl2、Bax、NF

3、κBp65多克隆抗体购于北京中杉金桥生物技术有限公司，相应二抗和化学发光试剂，均购自NEB公司。MTT、DMSO、AO均购自美国Amresco公司。1．2细胞培养人胃癌细胞株SGC7901从中南大学湘雅医学院肿瘤研究所引进，培养于含10%灭活小牛血清，100U/ml青霉素，100μg/ml链霉素的RPMI1640培养液中,在37℃，饱和湿度，5%CO2培养箱培养，每2～3天传代。1．3增殖抑制率检测SGC7901细胞以3×104/ml的浓度接种于96孔板，每孔加入180μl，待细胞贴壁后加20μl不同浓度ChR，使其终浓度分别为10、20、40、80μM，溶媒对照组加入相同体

4、积含终浓度为0.1%DMSO的完全培养基，每组设6个复孔，处理48h后加入MTT测吸光度值A，计算增殖抑制率，增殖抑制率（%）＝（1－实验组A均值/对照组A均值）×100%，实验重复3次。1．4细胞凋亡检测细胞以3×105/瓶接种，24h后换液同步化，24h后分别用终浓度为10、20、40、80μM的ChR、0.1%的DMSO完全培养基处理48h后，收集细胞，实验重复3次。（1）丫啶橙（AO）染色：以PBS悬浮细胞团，调整细胞浓度为1×106，取出95μl细胞悬液与5μl丫啶橙（100μg/ml）混匀后，涂片后镜检拍照。（2）流式细胞术：预冷的PBS洗涤细胞，用4℃的70%乙醇固定

5、24h后，2000r/min离心，以PBS洗1次，重悬于PBS中加入0.5ml经高温处理的无DNA酶活性的RNaseA，使终浓度为500μg/ml，再加入1ml碘化丙啶PI（100μg/ml），轻轻混匀，于室温暗处作用15min后，上机检测。1．5,CasaliP.InhibitionofFasmediatedapoptosisbyantigen:implicationsforlymphomagenesisJ.Autoimmunity,2002，35(4):283289.4SherrCJ.ThePezcollerLecture:cancercellcyclerevisitedJ

6、.CancerRes,2000,60(14):3689.5SunSC,XiaoG.DeregulationofNFkappaBanditsupstreamkinasesincancerJ.CancerMetastasisRev,2003,22(4):405422.6KarinM,CaoY,GretenFR,etal.NFkappaBincancer:frominnocentbystandertomajorculpritJ.NatRevCancer,2002,2(4):301310.7MayoM.Regula,KarenEns,LorrieA,Kirshenbaum.IKKβ

7、IsrequiredforNFкBmediatedBcl2activationinventricularmyocytesJ.BiolChem,2002,10(4):10741076.9MatsushitaH，MorishitaR,NataT,etal.HypoxiainducedendothelialapoptosisthroughnuclearfactorkB(NFκB)mediatedbcl2suppressionJ.CirculationResea