大蒜素对人胃癌sgc7901细胞生长的影响

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1、大蒜素对人胃癌SGC7901细胞生长的影响【关键词】大蒜素;胃癌细胞;增殖;凋亡　　Abstract：ObjectiveToinvestigatetheeffectsofallicinontheproliferationandapoptosisofgastriccancercelllineSGC7901.MethodsTheSGC7901cellsinethecellgroetry(FCM).TheexpressionofKi67ingastriccancercellsmunohistochemicalstaining.ResultsAllicineffectivelyinhibited

2、thegroanneratacertainrangeofconcentrations.Theinhibitoryrateent,theapoptosisrateorcell;proliferation;apoptosis　　胃癌是最常见的恶性肿瘤之一。以化疗为主的综合治疗是晚期胃癌的主要治疗手段，常用的化疗药物大多既能杀伤肿瘤细胞，又能损伤正常的组织细胞，从而对胃癌患者的总体生存期并无明显改善。因此，在肿瘤化疗过程中对肿瘤细胞最大限度的杀伤，而对正常细胞毒性最低的药物研发越来越引起重视。大蒜素是从大蒜球茎中分离出的一种油状液体，主要成分为二烯丙基三硫，是大蒜素发挥抗癌活性的主要物质[1-

3、2]。研究证明大蒜有良好的防癌、抗癌作用[3]。本实验将大蒜素作用于人胃癌细胞SGC-7901，研究大蒜素对肿瘤细胞的杀伤作用。　　1材料和方法　　1.1材料胃癌细胞株SGC7901(中国科学院细胞生物研究所)，大蒜素注射液(上海禾丰制药有限公司)，Ki67抗体及辣根过氧化物酶(HRP)标记的第二抗体(SantaCruz公司)，RPMI1640(Invitriogen公司)，小牛血清(杭州四季青公司)。　　1.2方法　　1.2.1细胞培养人胃癌细胞株SGC7901用含10%小牛血清的RPMI1640培养基，在37℃、5%CO2的饱和湿度条件下培养。　　1.2.2MTT法检测细胞抑制率取处

4、于对数生长期的胃癌SGC7901细胞,常规胰酶消化后制成单细胞悬液,使细胞密度为(4～5)×107/L;将细胞接种于96孔板中,每孔0.1ml,在37℃、5%CO2的饱和湿度条件下培养24h，分别加入0、3、6、12、24mg/L的大蒜素，继续培养48h,随后每孔加入5g/L的MTT20μl,继续培养4h，倾尽上清。每孔加入二甲基亚砜0.1ml，摇床上摇动约15min以充分溶解,用酶标仪在波长570nm处检测各孔光密度值(D值),计算细胞生长抑制率。每组实验重复6次。细胞生长抑制率=(1-实验组平均D值)/空白对照组平均D值×100%。　　1.2.3流式细胞仪检测细胞凋亡率大蒜素(3mg

5、/L)作用于胃癌SGC7901细胞12、24和48h后收集细胞，将收获的各组细胞制成单细胞悬液,加入预冷的70%冰乙醇,-20℃内固定24h,加RNA酶(终浓度为50mg/L)37℃反应1h，再加入碘化丙啶溶液(质量浓度100mg/L)避光染色30min后，在流式细胞仪上检测胃癌SGC7901细胞的凋亡率。每组实验重复5次。　　1.2.4免疫细胞化学法检测Ki67蛋白的表达胃癌SGC7901细胞的单细胞悬液制备同1.2.2方法，将细胞接种于预先放置盖玻片的24孔板中,放入培养箱中继续培养24h，弃去培养液,加入含大蒜素(3mg/L)培养液继续培养48h，弃去培养液,用PBS冲洗3次,取出

6、盖玻片,放入冷丙酮中固定20min。免疫细胞化学染色严格按SP试剂盒操作说明书进行。Ki67蛋白的阳性表达表现为细胞核出现黄色或棕色颗粒。每一个玻片随机选取5个高倍视野(×400),在每个视野下随机观察200个细胞,计算细胞阳性率。并取5个玻片的平均值。　　1.3统计学处理采用SPSS10.0软件进行数据处理。计量资料以±s表示，采用单因素方差分析，P<0.05为差异有统计学意义。　　2.3大蒜素对胃癌SGC7901细胞Ki67蛋白表达的影响大蒜素(3mg/L)作用于胃癌SGC7901细胞48h后,Ki67蛋白的阳性表达率下降。与对照组之间的差异有统计学意义(P<0.05，表

7、3)。表2大蒜素诱导胃癌SGC7901细胞凋亡的作用(n=5，±s，%)表3大蒜素作用胃癌SGC7901细胞Ki67蛋白的阳性表达率(n=5，±s)　　3讨论　　大蒜是百合科葱属植物的鳞茎，目前认为大蒜中主要的生物活性物质是大蒜所特有的含硫化合物，其中最重要的是二烯丙基三硫，又名大蒜素(分子式为C6H10S3)，临床除抗菌消炎外，也可抑制肿瘤生长，如大蒜素可有效抑制人前列腺癌[4]、结肠癌HT-29细胞[5]、胃癌SGC7901细胞