pparγ在胃癌的表达及曲格列酮对胃癌sgc7901细胞生长的影响

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1、PPARγ在胃癌的表达及曲格列酮对胃癌SGC7901细胞生长的影响：崔涛，刘莹，朱祖安，刘霞【摘要】目的探讨过氧化物酶体增殖物活化受体γ（PPARγ）在胃癌及癌前病变中的表达，研究PPARγ激动剂曲格列酮（troglitazone,TGZ）对人胃癌细胞SGC7901生长抑制作用及其作用机制。方法免疫组织化学方法检测PPARγ在胃癌及癌前病变中的表达；体外培养SGC7901细胞给予TGZ干预，四甲基偶氮唑蓝（MTT）法、流式细胞术、苏木精-伊红染色、免疫细胞化学方法、SO液体配成浓度100mmol/L，-20℃保存备用。TGZ作用浓度分为6组：0、6.25、12.5、25、50、100μmol

2、/L共6个剂量组。四唑蓝比色试验按照上述分组进行，根据MTT结果挑选出第1、4、5组进行苏木精-伊红染色、免疫组织化学染色、TT法）取SGC7901细胞1×108/L接种于96孔培养板,每孔200μl，置37℃、5%CO2及饱和湿度条件下待24h细胞贴壁生长后，弃上清，按照上述实验分组设计分别加入含有TGZ的培养液，每组设6个复孔，重复2板，分别培养至48h、72h，弃上清，每孔加入5g/LMTT液20μl，4h后每孔加入150μlDMSO振荡混匀，酶标仪测定490nm处的吸光度，计算抑制率。抑制率=（1－给药组D值/空白组D值）×100%。1.2.3苏木精-伊红染色用1640培养液稀释肿瘤

3、单细胞悬液浓度至2×105/ml，以每孔1ml单细胞悬液接种于6孔板中，培养板每孔内放置3枚直径10mm的圆形盖玻片。按照实验分组设计，每组每孔分别加入含有TGZ的培养液各1ml。当SGC7901细胞与TGZ共同培养72h后，取出6孔板内的玻片，4%多聚甲醛固定5～10min，取出晾干，干燥彻底后即可进行苏木精-伊红染色，观察形态学改变。1.2.4免疫组织化学染色及I1640培养液稀释肿瘤单细胞悬液浓度至2×108/L，以每孔1ml单细胞悬液接种于24孔板中于37℃、5%CO2培养箱内培养，待细胞贴壁后，按照上述实验分组设计，每组每孔分别加入含有TGZ的培养液各1ml，培养48h、72h后，

4、收集细胞，70%冰乙醇固定，PI染液染色后采用Beckon/DickinsonFACSCalibur型流式细胞仪进行流式细胞术检测，在488nm波长处进行检测，记录激发波长493nm处的红色荧光。检测细胞凋亡与细胞周期改变。1.3数据处理实验结果采用Stata8.0软件进行统计分析。各组数据均以±s表示，采用单因素方差分析，并采用Scheffe法分析组间差异。检验水准：α=0.05。2结果2.1PPARγ在胃癌中表达在轻度不典型增生、重度不典型增生及胃癌标本中，PPARγ阳性表达率为15.15％（5/33）、66.67％（14/21）、71.43％（60/84），轻度不典型增生与重度不典型增

5、生及胃癌组间有统计学差异（P＜0.05），重度不典型增生与胃癌组之间未见统计学差异。2.2体外实验结果2.2.1MTT法检测应用TGZ对胃癌SGC7901细胞的生长的影响SGC7901细胞与不同浓度的TGZ共同培养，细胞的生长受到不同程度的抑制，当药物作用48h，TGZ浓度达50μmol/L及以上时，与对照组相比P＜0.05，同时其作用具有浓度及剂量依赖性（表1）。表1TGZ作用48、72h后对SGC7901细胞抑制作用与0μmol/L组比较:△P<0.052.2.2形态学观察TGZ对胃癌SGC7901细胞的影响SGC7901细胞与TGZ共同培养72h，实验组肿瘤细胞的生长较阴性对照组

6、逐渐稀疏，细胞体积变小、形态不规则、细胞皱缩、核固缩、胞浆空泡等形态学表现（图1）。图1TGZ作用SGC7901后形态学表现（苏木精-伊红染色，10×40）2.2.3TGZ作用后胃癌SGC7901细胞PPARγ的改变2.2.3.2期的细胞比例之间的差异无统计学意义（P>0.05）（表4）。表4TGZ对SGC7901细胞周期的影响与0μmol/L组比较：△P<0.053讨论PPAR是一类由配体激活的核转录因子，它是由英国科学家Issemann和Green于1990年首先克隆成功，属于Ⅱ型核受体超家族成员［1］。目前发现PPAR家族在脊椎动物中至少有3种亚型:PPARα、PPARβ、

7、PPARγ。PPARγ最初被认为是调节脂肪细胞分化的核激素受体，近年来其在抗肿瘤方面的研究较多，PPARγ与相应的配体结合后，转入核内结合启动子区域过氧化物酶体增殖物反应元件（peroxisomeproliferatorresponsiveelement,PPRE），调节c-ras、c-myc、c-fos等生长调控基因的表达；同时还调节许多细胞因子、黏附分子以及信号转导分子等的表达，对PPARγ研究已成为肿瘤