曲格列酮诱导胃癌sgc7901细胞凋亡的研究论文

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1、曲格列酮诱导胃癌SGC7901细胞凋亡的研究论文.freelol/L)加药组，应用流式细胞仪检测曲格列酮不同浓度对胃癌SGC7901细胞凋亡率的影响;RTPCR及ethodsHumangastricadenocarcinomacelllineSGC7901entgroupsol/L).ThechangesofapoptosisateachconcentrationintheSGC7901etrymethod.ThemRNAandproteinexpressionofPPARγandp53etrydetection.Furthermore,therateofapoptosisi

2、nSGC7901cellstreatedanner.AftertreatedRNAandproteinexpressionofp53ediatedthroughPPARγsignalingpathacellinvitro.Themechanismisprobablyassociatedightbeanoveltherapeutictargetforgastricadenocarcinoma.【Keyeproliferatoractivatedreceptorgamma,p53,gastricadenocarcinoma,apoptosis肿瘤的发生是一个多因素、多步骤的复杂过程，涉

3、及一系列遗传学改变，包括癌基因的激活和抑癌基因的失活。胃癌是我国最常见的消化道肿瘤，其发生、发展亦涉及多个基因的相互作用，如RAS基因家族、MYC基因家族、p53、RB等1,2。过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)属于核激素受体超家族中的成员，是一类由配体激活的核转录因子。近年来许多研究表明PPARγ及其配体在人类多种肿瘤细胞的增殖、分化及凋亡中具有调节作用3，曲格列酮(TGZ)是其合成配体中药效最强的一种药物，且其毒副作用相对较小4。p53是人类肿瘤中最常见的突变基因。p53基因的突变或失活与多种肿瘤的发生、发展密切相关，几乎在所有恶性肿瘤中都存在P53蛋白表达上调的现象5。

4、为了探讨人类胃癌细胞中PPARγ经其特异性配体激活后，能否促进胃癌细胞凋亡及其可能涉及机制，本实验利用人胃癌SGC7901细胞进行体外研究，以期寻找一条新的胃癌治疗途径。1材料与方法1.1材料1.1.1药品与试剂：细胞培养基RPMI1640购自美国GIBCO公司，胎牛血清为杭州四季青公司生产。曲格列酮为生物晶美公司产品。药物实验前TGZ溶解于二甲基亚砜(DMSO)中，用无血清培养基稀释至200μmol/L原液，-20℃冻存，使用时用细胞培养液稀释至终浓度。TRIZOL试剂购自Invitrogen公司，RTPCR试剂盒购自大连宝生物公司，流式细胞试剂购自Beckman公司，PPAR

5、γ及p53小鼠抗人单克隆抗体购自生物晶美公司。1.1.2细胞培养：人胃癌SGC7901细胞株购自于中科院上海细胞库，培养基为含10%胎牛血清的RPMI1640(100U/ml青霉素、100μg/ml庆大霉素)，在37℃、5%CO2、饱和湿度条件下培养。1.1.3实验分组：将SGC7901对数生长期细胞悬液调整为4×105/ml接种，培养24h后，随机分为5组：对照组(细胞+培养液)和加药组(5、10、15、20μmol/L组)。对照组和加药组均按48h培养。1.2方法1.2.1流式细胞仪检测凋亡率：收集培养48h后的对照组和加药组细胞，用75%冰乙醇固定，调整细胞浓度为5×107

6、/ml，分别取100μl的细胞悬液于流式管中，每管加入4.5μlAnnexinFITC冰上放置避光10min，再加入2.5μlPI，避光反应5min，在488nm波长处进行检测，记录激发波长493nm处的红色荧光，上流式细胞仪(EpicsXLⅡ型BeckmanCoulter)进行检测。按TRIZOL试剂说明书提取细胞中的总RNA，测定RNA的浓度及纯度。取总RNA2μl，按RT试剂盒说明进行逆转录，随后取RT产物1μl进行PCR扩增。PPARγ、p53及内参βactin引物序列及产物长度参见表1。PCR反应条件为：25μl体系95℃预变性5min;95℃变性30s，55℃退火3

7、0s，72℃延伸30s，共30个循环;最后72℃充分延伸10min。表1RTPCR引物序列及产物长度1.2.4l培养瓶中，每瓶10ml，待细胞贴壁生长后，弃上清，按照上述实验分组，加药作用48h后收集细胞，提取总蛋白，蛋白定量后进行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)，转膜后加入含小鼠抗人PPARγ、p53单克隆抗体(1∶500稀释)的一抗封闭液，置摇床上30min，4℃过夜，次日漂洗封闭后加入同位素标记兔抗鼠IgG(1∶2000稀释)的封闭液，