大蒜素诱导人胃癌sgc7901细胞m期阻滞机制的研究

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1、中国医科大学研究生学位论文独创性声明本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。论文作者签名：色：丝：幺日期：211；。窆：22中国医科大学研究生学位论文版权使用授权书本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位

2、属中国医科大学。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为中国医科大学，且导师为通讯作者，通讯作者单位亦署名为中国医科大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容(保密内容除外)，以采用影印、缩印或其他手段保存论文。论文作者签名：碴!丝!匕指导教师签名：蕴丝日期：2，。’I．等．31·中文论著摘要·大蒜素诱导人胃癌SGC-7901细胞M期阻滞机制研究前言大蒜是百合科葱属植物蒜的鳞茎。流行病学研究已证实大蒜具有多种防病抗病功能。大蒜的有效成分主要是一些含硫有机化合物，其中较典型的一

3、种为大蒜素。大蒜素(allicin)又名蒜素，大蒜新素，大蒜辣素，化学名二烯丙基三硫化物(diallyltrisulfide)，具有抗感染，降血脂，防治动脉硬化，防止DNA损伤，提高细胞活力，提高细胞抗氧化及解毒能力等多种抗病活性。近来的研究还发现大蒜素具有良好的抗癌、防癌作用。大蒜素的抗肿瘤机制较多，其中较重要的一种是可诱导肿瘤细胞发生周期特异性阻滞。本室前期研究已发现大蒜素可使人胃癌细胞株SGC-7901和MGC-803细胞周期阻滞于M期，但这种M期阻滞的机制尚不清楚。临床常用的选择性作用于M期的长春碱类抗肿瘤药物如长春新碱，是通过破坏微管动力学的稳定性，促进微管解聚

4、，阻碍纺锤体形成而使肿瘤细胞阻滞于M期的。而这种微管动力学的稳定性又是受到有丝分裂促进因子MPFIiJ]p34“／cyclinB，复合物通过磷酸化微管相关蛋白MAP来调节的。大蒜素是否与长春碱类药物一样，也是通过促进微管解聚来诱导肿瘤细胞M期阻滞的?它们促进微管解聚的作用是否与MPF的表达有关?这些问题尚有待研究。目的本研究采用免疫荧光染色结合激光共聚焦显微镜技术，观察大蒜素和长春新碱处理前后SGC一7901细胞中微管结构及cyclinBI在胞内分布的变化，并定量分析cyclinBl在用药前后量的改变，旨在揭示大蒜素诱导胃癌细胞M期阻滞的机制。方法采用细胞培养技术进行人胃

5、癌细胞系SGC7901细胞的培养，以MTT比色法检测人胃癌细胞系SGC-7901细胞的增殖抑制率；采用免疫荧光染色方法，取对数生长期细胞接种于放置有洁净无菌盖玻片的6孔培养板中，分别加入IC50剂量的大蒜素或长春新碱，处理72h或24h后经a微管蛋白抗体或cyclinB航体间接免疫荧光染色，在CLSM下观察并拍照。比较大蒜素处理前后M期细胞占总细胞数百分比的变化，观察细胞微管结构及cyclinB。在胞内分布的变化，并利用Leicaconfocalsoftware软件定量分析cyclinB．荧光强度在用药前后的改变。实验重复进行3次，以平均荧光强度作为该蛋白的相对表达量。结

6、果1．大蒜素和长春新碱对SGC一7901细胞的增殖抑制作用在大蒜素ICSO药物浓度(24h为7．2肛g／ml，72h为20ug／m1)及长春新碱It50药物浓度(24h为0．29¨g／m1，72h为0．059肛g／m1)作用下，SGC一7901细胞均有明显的抑制作用，且呈浓度依赖性。2．Q微管蛋白抗体免疫荧光染色经IC50剂量大蒜素和长春新碱处理72h后有丝分裂期细胞所占百分数分别为30．61％和34．92％，明显高于对照组的百分数(4．69％)，有统计学意义(PO．05)。大蒜素和长春新碱处理组细胞中出现一些多核细胞。对照组细胞

7、呈多角形、菱形、梭形等正常形态，可以清楚地看到胞质中有完整的条状或网状微管结构。而经过大蒜素处理后的细胞与对照细胞相比大部分明显变小、变圆，胞质中正常的微管结构消失，微管蛋白或凝聚于核周，或弥漫散布。此种改变与长春新碱处理组的改变相似。3．cyclinB。免疫荧光染色形态学及计量学观察对照组间期细胞cyclinBt主要散布于胞质，核内较少。经IC50剂量大蒜素和2长春新碱处理细胞24h后，细胞质中cyclinB。表达升高，并向核内转移，浓聚成团。利用软件定量分析cyclinB，蛋白荧光强度结果显示，经过大蒜素和长春新碱处理后细