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1、HPLC法测定增食颗粒中柚皮苷和橙皮苷的含量论文.freelasilC18柱,以乙腈-水-磷酸(20∶80∶0.02)为流动相,流速1.0mL/min,检测波长283nm,柱温35℃,进样量20μL。结果柚皮苷回归方程为：Y＝1.9896×106X－1.243×103,r＝0.9999,线性范围为0.1785～0.8925μg。橙皮苷回归方程为：Y＝1.9649×106X－1.015×104,r＝0.9999,线性范围为0.07368～0.3684μg。柚皮苷平均回收率为97.24%,.freelpoasilC18(150mm×4.6mm,5μm)；流动
2、相：乙腈-水-磷酸(20∶80∶0.02)；流速：1.0mL/min；检测波长：283nm；柱温：35℃；进样量：20μL。对照品、样品及阴性对照色谱图见图1。2.2对照品溶液的制备精密称取柚皮苷和橙皮苷对照品适量,加甲醇制成含柚皮苷35.700μg/mL和橙皮苷14.736μg/mL的对照品混合溶液。2.3供试品溶液的制备取本品10袋,研细,精密称取约0.2g,置25mL容量瓶中,加甲醇20mL,超声处理40min,放冷,加甲醇定容,摇匀,经0.45μm微孔滤膜滤过,即得。2.4线性关系考察精密吸取柚皮苷和橙皮苷对照品混合溶液5.0、10.0、15.0
3、、20.0、25.0μL,进样,按上述色谱条件测定峰面积,以峰面积为纵坐标、含量(μg)为横坐标绘制标准曲线。柚皮苷回归方程为：Y＝1.9896×106X－1.243×103,r＝0.9999,线性范围为0.1785～0.8925μg；橙皮苷回归方程为：Y＝1.9649×106X－1.015×104,r＝0.9999,线性范围为0.07368～0.3684μg。结果表明,柚皮苷和橙皮苷进样量与峰面积呈良好线性关系。2.5阴性对照试验取去枳实的阴性制剂,按“2.3”项下方法制备供试液,按上述色谱条件测定。结果阴性对照溶液在与橙皮苷和柚皮苷相同保留时间处,无
4、色谱峰出现。2.6精密度试验精密吸取对照品溶液20μL,重复进样,按上述色谱条件测定,测得柚皮苷峰面积的RSD＝1.03%(n＝5),橙皮苷峰面积的RSD＝0.57%(n＝5)。2.7稳定性试验取同一份供试品溶液,在6h内不同时间进样,测得柚皮苷峰面积的RSD＝0.86%(n＝6),橙皮苷峰面积的RSD＝1.75%(n＝6),供试品溶液在6h内基本稳定。2.8重复性试验精密称取同一份样品5份,分别按上述方法制备和测定,柚皮苷含量的RSD＝1.57%,橙皮苷含量的RSD＝0.84%。2.9加样回收率试验取已知含量的样品约0.2g,精密称取6份,分别准确加入
5、对照品溶液适量,按样品测定方法提取、测定,计算回收率,结果见表1、表2。表1柚皮苷加样回收率试验结果(略)表2橙皮苷加样回收率试验结果(略)2.10样品测定取不同批号的样品,分别按“2.3”项下方法制备供试品溶液,按上述色谱条件测定,按外标法,用峰面积计算样品含量,结果见表3。表3增食颗粒中柚皮苷和橙皮苷的含量测定结果(略)3讨论3.1色谱条件的选择在283、286、288nm处,以甲醇-水-磷酸及乙腈-水-磷酸为流动相系统的分离效果进行了考察,结果表明：3个波长的分离效果接近,在283nm处,灵敏度较高；以甲醇-水-磷酸为流动相,峰形差,柚皮苷和橙皮苷
6、的分离效果不理想。通过对比,确定以283nm为检测波长,以乙腈-水-磷酸(20∶80∶0.02)为流动相系统,待测组份保留适中,柚皮苷和橙皮苷的分离度大于2。但应注意酸的浓度增加,柚皮苷和橙皮苷的分离度会下降,酸浓度以0.02～0.04较理想。3.2提取方法的确定采用甲醇超声提取的方法,样品处理简单,误差小。通过对20、40、60min等不同提取时间的考察,以甲醇超声提取较理想【
