hplc测定橘叶中橙皮苷的含量

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1、HPLC测定橘叶中橙皮苷的含量【摘要】目的：建立高效液相色谱法测定橘叶中橙皮苷含量的方法。方法：采用高效液相色谱法，色谱柱为kromasilC18（4.6mm×250mm,5　μm）,流动相为甲醇—醋酸（36%）—水（38∶2∶60），检测波长为283　nm。结果：橙皮苷检测浓度在（0.05～0.5）mg/mL范围内线性关系良好（r=0.9995），平均加样回收率为96.6%，RSD=1.9%（n=5）。结论：本方法简便、灵敏、准确，可用于橘叶的质量控制。【关键词】高效液相色谱法橘叶橙皮苷含量测定1实验材料高效液相色谱仪为SSI-seriesⅣpump泵SSIModel500-D

2、ETECTOR单元液相色谱仪；PC-3000系统检测仪；TL-9000色谱工作站；超声处理器（LC-350A）；甲醇为国产色谱纯溶剂，天津市永大化学试剂开发中心出产；乙酸为国产分析纯试剂；水为实验室专用纯水机XYD-10-H处理超纯水；橙皮苷对照品由中国生物制品检验所提供，批号：110721-200512；橘叶8批，由中药材市场购买，均由山西省药品检验所中药室主任和建国鉴定。2方法与结果52.1色谱条件色谱柱为4.6mm×250mm，十八烷基键合硅胶为填充剂，柱温为常温，检测波长为283nm，以甲醇—醋酸（36%）—水（38∶2∶60）为流动相，流速0.8μL/min。对照品及样

3、品的液相色谱图见图1。A.对照品B.样品1.橙皮苷图1对照品及样品的HPLC图2.2对照品溶液制备精密称取橙皮苷对照品适量，加甲醇制成每1mL含0.4mg橙皮苷的溶液，摇匀，作为对照品溶液备用。2.3供试品溶液制备将收集的橘叶研成粗粉，精密称定1g，置索氏提取器中，加石油醚（60℃～90℃）80mL，加热回流3h，弃去石油醚，药渣挥干，加甲醇80mL，再加热回流至提取液无色，放冷，滤过，滤液置100mL量瓶中，用少量甲醇分数次洗涤容器，洗液滤入同一量瓶中，加甲醇定容至刻度。52.4线性关系考察精密称取橙皮苷对照品0.00054g、0.00103g、0.00204g、0.00416

4、g、0.00509g分别置10mL容量瓶中加甲醇制成每1mL含0.05mg、0.1mg、0.2mg、0.4mg、0.5mg橙皮苷的溶液，各取10μL注入色谱仪中,按色谱条件测得峰面积积分值，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为Y=204621152700X+2155993.329，r=0.9995，橙皮苷在（0.05～0.5）mg/mL呈良好的线性关系。2.5精密度试验精密吸取2.2中的对照品溶液（0.4mg/mL）10μL连续进样6次，测橙皮苷峰面积，结果分别为88652906、86590036、85480256、87424068、87424661、8767

5、9805，RSD为0.9%。表明仪器进样精密度良好。2.6稳定性实验取2.3供试样品溶液分别在0h、2h、4h、8h、20h进样10μL，测得橙皮苷的峰面积分别为25926741、26104361、26181248、26653055、25888751，RSD为2.3%。表明供试品溶液在室温下20　h内基本稳定。52.7重现性实验取亳州市场购买的江苏产地的橘叶，按2.3供试品溶液制备方法制备6份，分别进样10　μL，测定RSD为1.7%。表明测定方法重现性良好。2.8加样回归试验取已知含量的药材5份，分别加入同样含量的橙皮苷对照品，按供试品溶液制备方法和测定条件测定。结果见表1。2

6、.9样品测定取不同产地橘叶药材，按2.3方法制备供试品溶液，测定橙皮苷含量，结果见表2。3含量测定限度根据表2橙皮苷含量测定结果，将橘叶药材的橙皮苷含量限度定为本品按干燥品计算，含橙皮苷（C28H34O15）不得少于1.25%。54讨论用HPLC测定橘叶中橙皮苷的含量，结果准确，精密度、重现性良好，平均回收率96.6%，RSD为1.9%。在提取方法上，比较了超声处理与加热回流提取的效果，结果表明加热回流提取比较完全，因此应用加热回流法。橙皮苷可以作为橘叶质量控制的指标。【参考文献】［1］江苏新医学院.中药大辞典（下册）［M］.上海：上海科学技术出版社，1975：2637.［2］肖

7、培根.新编中药志［M］.北京：化学工业出版社，2002：349.5