hplc测定健脾增肥片中橙皮苷含量论文

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1、HPLC测定健脾增肥片中橙皮苷含量论文【摘要】目的建立健脾增肥片中橙皮苷的测定方法。方法采用HPLC法，色谱柱：KromasilC18柱(4.6mm×250mm，5μm)，流动相为甲醇醋酸水(体积比35∶4∶61)，柱温为室温，流速为1.0mL·min-1，检测波长为283nm。结果橙皮苷在0.3008～2.1056μg范围与峰面积呈良好线性关系(r=0.9999，n=7).freelinationmethodforhesperidinsinJianpizengfeitabletsbyHPLC.MethodsHPLCedonaKromasilC18column(250m

2、m×4.6mm,5μm)obilephaseatafloL·min-1andthedetection.ResultsItshoethodissensitive,accurate,reproducible,specificandcanbeusedforthequalitycontrolofJianpizengfeitabletsefficiently.KeyasilC18柱(4.6mm×250mm，5μm);德国BP211DSartorius电子天平(十万分之一);橙皮苷对照品(批号0721200010)购自中国药品生物制品检定所;健脾增肥片(自制，批号090326、090

3、411、090606);甲醇为色谱纯;水为重蒸水;其它试剂均为分析纯。2方法与结果2.1溶液的制备2.1.1对照品溶液的制备精密称取橙皮苷对照品适量，置量瓶中，用甲醇溶解并稀释制成每1mL中含75.2μg的溶液，摇匀，0.2μm微孔滤膜滤过，即得。2.1.2供试品溶液的制备取本品研细，称取细粉约1g，精密称定，置具塞三角瓶中，精密移入甲醇25mL，精密称重，超声90min，取出，放冷至室温，以甲醇补足重量，摇匀，0.2μm微孔滤膜滤过，即得。2.1.3阴性对照液的制备取处方组成中除陈皮外的其余各味药材，按健脾增肥片生产工艺制成缺陈皮的阴性对照品，按“2.1.2”项下的方法制

4、备得阴性对照液。2.2色谱条件及系统适用性试验色谱柱：KromasilC18柱(4.6mm×250mm，5μm);流动相：甲醇醋酸水(体积比35∶4∶61);流速：1.0mL·min-1;检测波长：283nm。分别取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照液10μL注入液相色谱仪，橙皮苷的保留时间约为20.1min，理论塔板数以橙皮苷峰计不低于5000，橙皮苷与其他物质可基线分离，且阴性对照液无干扰，见图1。2.3线性关系考察分别精密吸取橙皮苷对照品溶液4、8、12、16、20、24、28μL，注入液相色谱仪，记录峰面积。以峰面积(Y)为纵坐标，橙皮苷进样量(X)为横坐标，进行

5、线性回归，得回归方程为Y=1507500X-11112，r=0.9999(n=7)，表明橙皮苷在0.3008～2.1056μg范围内呈良好的线性关系。2.4精密度试验精密吸取对照品溶液10μL，连续进样6次，峰面积的RSD为0.73%，表明仪器精密度良好。2.5稳定性试验取健脾增肥片(批号090326)，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，分别在0、0.5、1、1.5、2、3、4、5、6h进样10μL，记录峰面积。结果峰面积的RSD为1.48%，表明供试品溶液在6h内稳定，可满足测定需要。2.6重复性试验取同一批号样品(批号090326)样品6份，按“2.1.2”项下方

6、法制备并进行测定，经外标法计算，橙皮苷平均含量为4.253mg·g-1，RSD为0.38%，结果表明本方法具有较好的重复性。2.7加样回收率试验取已知含量的健脾增肥片(批号：090326)0.5g，精密称定，共6份，分别精密加入橙皮苷对照品储备液(每1mL中含橙皮苷0.504mg)5.0mL，精密移入甲醇20mL，依法测定，橙皮苷平均加样回收率为101.68%，RSD1.45%。结果见表1。表1橙皮苷加样回收率试验结果2.8样品含量测定取3批健脾增肥片(090326、090411、090606)，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，分别进样10μL，记录峰面积，外标法计

7、算橙皮苷的含量，结果3个批号样品的含量分别为4.253、4.145、4.075mg·g-1。3讨论3.1将超声提取法与2005年版《中国药典》(一部)1收载的陈皮药材含量测定项下索氏提取法进行了比较，结果发现药典方法耗费时间很长(共约12h)，提取效率却比超声法低;而且索氏提取法制成的供试品溶液颜色较深，提示其提取的杂质亦较多，故选用超声法进行提取。同时考察了超声提取30、60、90min橙皮苷的提取效率，结果表明，超声不同时间的提取率有明显差异，超声时间越长，橙皮苷提取效率越高。因此确定供试品溶液提取方法为超声提