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1、HPLC法测定恒古骨伤愈片中橙皮苷的含量论文.freel-pack-C18色谱柱(150mm×4.6mm,5μm),以乙腈-0.4%磷酸水(20∶80)为流动相,检测波长283nm。结果橙皮苷线性范围为0.194～0.970μg,r＝0.9999,橙皮苷的平均回收率为98.50%,RSD＝0.63%。结论该方法用于测定恒古骨伤愈片中橙皮苷的含量,具有简便、准确、灵敏的特点,可作为该制剂质量控制的指标。【关键词】恒古骨伤愈片；橙皮苷；高效液相色谱法；含量测定Abstract：ObjectiveTod
2、eterminethecontentofHesperidininHengguGushangyuTabletsbyhighperformanceliquidchromatography.MethodsThedetermination-pack-C18column(150mm×4.6mm,5μm)obilephaseofacetonitrile-0.4%phosphoricacid.ResultsGoodlinearrelationshipofHesperidinbetountethodissimpl
3、e,.freelination恒古骨伤愈片是由中成药恒古骨伤愈合剂(收载于《国家中成药标准汇编骨伤科分册》)改变剂型而制成的新制剂1,药味由陈皮、红花、三七等9味中药组成,具有活血益气、补肝肾、接骨续筋、消肿止痛、促进骨折愈合的功效,用于新鲜骨折及陈旧骨折、股骨头坏死、骨关节病、腰椎间盘突出症等。为控制本品的质量,本试验采用高效液相色谱(HPLC)法测定了恒古骨伤愈片中橙皮苷的含量,作为其内在质量控制指标之一。1仪器与试药日本岛津LC-10AT高效液相色谱仪；SPD-10A紫外检测器；KQ-250
4、型超声波处理器。橙皮苷对照品购于中国药品生物制品检定所(批号1107221-200211,HPLC面积归一化法,测定含量为99.99%)；恒古骨伤愈片由吉林万德制药有限公司提供(批号20080401,20080402,20080403,20080501,20080502,20080503,20080504,20080505,20080506,2008057)。其他所用化学试剂均为国产AR级。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱：Shim-pack-C18(4.6mm×150mm,5μm)；流动相为乙腈
5、-0.4%磷酸水(20∶80)；流速：1mL/min；紫外检测波长：283nm；理论塔板数按大黄素计算不低于5000；柱温为室温2。2.2对照品溶液的制备精密称取橙皮苷对照品适量,加甲醇制成每1mL约含0.05mg的溶液,即对照品溶液。2.3供试品溶液的制备取本品20片,研细,取约0.3g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇25mL,称定重量,超声提取(功率180in,取出,放冷,再称定重量,加甲醇补足减失的重量,摇匀,用微孔滤膜(0.45μm)滤过,即得。2.4阴性对照溶液的制备按处方量制备
6、不含陈皮药材的阴性样品,按供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10μL,注入液相色谱仪中,按上述色谱条件测定。结果表明,阴性对照溶液色谱图中与对照品相应位置处无干扰,此法可行(见图1)。2.5线性关系考察精密称取橙皮苷对照品适量,加甲醇制成每1mL含橙皮苷0.0485mg的对照品溶液。精密吸取对照品溶液4、8、12、16、20μL注入高效液相色谱仪,记录色谱图,测定其峰面积。以峰面积值(A)对进样量(C)进行回归,得到回归方程为：Y＝100877
7、0.377X＋25623.859,r＝0.9999,结果表明,橙皮苷在0.194～0.970μg范围内进样量与峰面积呈良好的线性关系。2.6精密度试验精密吸取供试品溶液连续5次重复进样,测得橙皮苷峰面积RSD＝0.57%。2.7稳定性试验精密吸取供试品溶液在0、2、4、6h分别进样,进行测定。结果橙皮苷峰面积RSD＝0.47%,表明在6h内供试品溶液中橙皮苷含量稳定。2.8重复性试验精密称取同一批号样品5份,按供试品溶液的制备方法制备,依法进样分析,结果样品中橙皮苷含量RSD＝0.50%,表明其重
8、复性良好。2.9加样回收率试验精密称取橙皮苷对照品适量,加入到已测知橙皮苷含量的恒古骨伤愈片样品(批号20080401,橙皮苷含量3.0815mg/g)中,精密加入甲醇50mL,称定重量,超声提取30min,取出,放冷,再称定重量,加甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,制得供试品溶液,进样5μL,测定并计算回收率。结果平均回收率为98.5%,RSD＝0.63%。见表1。表1加样回收率试验结果（略）2.10样品测定按上述方法,制备供试品溶液,测定10批恒古骨伤愈片中橙皮苷的含量。测定结果
