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1、HPLC法测定大黄虫片中芍药苷的含量论文.freelm×250mm,5μm),以乙腈-0.1%磷酸溶液(14∶86)为流动相,流速1.0mL/min,柱温30℃,检测波长为230nm。结果芍药苷在0.10～0.90μg范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系,r＝0.9997,平均加样回收率为99.98%,RSD＝0.81%(n＝6)。结论本法操作简便,准确,.freelethodfordeterminingthecontentofpaeoniflorininDahuangZhechongTablets.Method
2、sStationaryphasen(4.6mm×250mm,5μm),mobilephase,floL/minandcolumntemperatureethodissimple,accurate,ination大黄虫片由熟大黄、土鳖虫、水蛭、白芍等12味中药组成,具有活血破瘀、通经消痞功效,用于瘀血内停,腹部肿块,肌肤甲错,目眶黯黑,潮热羸瘦,经闭不行。本试验采用高效液相色谱(HPLC)法测定大黄虫片中芍药苷的含量,可更好地控制该制剂的质量。1仪器与试药Agilent1100系列高效液相色谱仪：G1311A四
3、元泵,G1313A自动进样器,G1379A脱气机,G1314Vm×250mm,5μm),流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液(14∶86)1,流速1.0mL/min,柱温30℃,检测波长为230nm,进样量为10μL。2.2溶液的制备2.2.1对照品溶液的制备精密称取芍药苷对照品适量,加甲醇制成每1mL含芍药苷40μg的溶液,作为对照品溶液。2.2.2供试品溶液的制备取本品20片,研细,精密称取2g,置锥形瓶中,加稀乙醇50mL,超声提取(功率220in,放冷,过滤,蒸干。残渣加稀乙醇适量使溶解,通过中性氧化铝柱(10
4、0～200目,4g,内径15mm),以稀乙醇洗脱,收集洗液50mL,蒸干,残渣用稀乙醇溶解,并转移至20mL量瓶中,用稀乙醇稀释至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.45μm)滤过,取续滤液,即得。2.2.3阴性对照溶液的制备按处方比例和工艺,制成不含白芍药材的阴性对照品,按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液并测定。2.3空白试验按上述色谱条件,吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10μL,分别注入液相色谱仪进行测定。在与对照品色谱相应的位置上,供试品溶液具有相同保留时间的色谱峰,而阴性对照在此保留时间无干扰(见
5、图1)。2.4线性关系考察精密称取芍药苷对照品,加甲醇制成浓度分别为10.0、20.0、30.0、40.0、60.0、90.0μg/mL的系列溶液,分别进样10μL,在上述色谱条件下测定峰面积。以芍药苷的进样量(μg)为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,得回归方程为：Y＝2437.0X＋35.1,r＝0.9997,表明芍药苷进样量在0.10～0.90μg范围内呈良好的线性关系。2.5精密度试验精密吸取芍药苷对照品溶液(40μg/mL)10μL,按上述色谱条件,分别连续进样6次,测定峰面积,结果芍药苷峰面积的平
6、均值为1036.86,RSD＝0.91%,表明本法精密度良好。2.6重复性试验取同一批号(批号为860003)样品,按供试品溶液的制备方法平行制备6份,按上述色谱条件进行测定。结果芍药苷含量的平均值为0.2923mg/片,RSD＝1.68%。表明本法的重复性良好。2.7稳定性试验取同一批号(批号为860003)样品,按供试品溶液制备方法制备,按上述色谱条件,分别在0、2、4、6、8、10h进样1次,测定峰面积,结果芍药苷峰面积的平均值为1238.26,RSD＝1.45%。表明供试品溶液在10h内基本稳定。2.8加
7、样回收率试验取已知含量的同批号(批号为860003,含量0.291mg/片)样品约1g,精密称取6份,分别精密加入芍药苷对照品适量,按供试品溶液制备方法制成供试品溶液,按上述色谱条件测定,计算。结果芍药苷的平均回收率为99.98%,RSD＝0.81%。见表1。表1加样回收率测定结果（略）2.9样品测定取样品约2g,精密称定,照“2.2.2”项下方法制成供试液,精密吸取10μL注入液相色谱仪,按上述色谱条件测定,以外标法计算样品中芍药苷的含量,结果见表2。表2芍药苷含量测定结果（略）3讨论芍药苷对照品甲醇溶液在紫外
8、分光光度计扫描下,最大吸收波长为230nm,故选定230nm为检测波长。在供试品溶液的制备中,曾采用甲醇、75%乙醇、稀乙醇作为溶剂,对超声和回流提取进行了比较试验。结果表明,采用稀乙醇超声提取与采用稀乙醇回流,测得的含量高且一致,但超声处理方法简单快速,故选用稀乙醇超声处理直接提取样品。同时进行了超声提取时间的考察,分别超声30、40、50、60min,结果超声40mi
