HPLC法测定腰痛片中芍药苷含量.doc

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1、HPLC法测定腰痛片中芍药苷含量【摘要】目的建立腰痛片中芍药苷的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法，ShimpackVP-ODSC18(4.6mm×150mm,5μm）为色谱柱，甲醇-0.05%磷酸（体积比40∶65）为流动相，检测波长为230nm，流速为1.0ml/min。结果芍药苷线性范围为0.1448～2.8960μg，平均回收率为100.4％，RSD为1.53％（n＝6）。结论该方法操作简便，结果准确，灵敏度高，重现性好，能有效控制腰痛片的质量。【关键词】腰痛片；芍药苷；高效液相色谱法　　腰痛片收

2、载于《部颁标准》中药分册第5册，由杜仲叶、续断、赤芍等12味中药组成，具有强腰补肾、活血止痛的功效，临床效果较好［1］。部颁标准中没有收载该制剂的含量测定指标。已有文献采用HPLC法测定该制剂中补骨脂素和异补骨脂素的含量［2，3］。赤芍具有清热凉血，散瘀止痛的功效，能反映腰痛片活血止痛的功效，因此本文选择芍药苷作为腰痛片含量测定的指标，采用HPLC法测定制剂中芍药苷的含量［4］，为制订该制剂的质量标准提供实验依据。　　1仪器与试药　　　　Agilent1100型高效液相色谱仪（美国，Agilent）；Bra

3、nsonSB3200超声波清洗仪（上海，Branson）；色谱柱为ShimpackVP-ODSC18(4.6mm×150mm,5μm)。　　　　腰痛片（桂林三金药业股份有限公司，基片重0.35g）；芍药苷对照品（供含量测定用，中国药品生物制品检定所提供，批号为110736-200423）；甲醇、磷酸均为色谱纯（天津四友）；水为去离子纯化水；其他试剂均为分析纯。　　2方法与结果　　2.1色谱条件　　色谱柱：ShimpackVP-ODSC18(4.6mm×150mm,5μm）；以甲醇-0.05%磷酸（体积比40

4、∶65）为流动相；流速为1.0mL/min；检测波长为230nm；进样量10μL；理论板数按芍药苷峰计算应不低于3000。　　2.2对照品溶液的制备　　精密称取经五氧化二磷减压干燥36h的芍药苷对照品适量，加甲醇制成每1mL含60μg的溶液，即得。　　2.3供试品溶液的制备3　　取本品10片，去糖衣，研细，取约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积分数为50%的甲醇50mL，称定重量，超声处理（功率400W，频率50kHz）30min，放冷，再称定重量，用体积分数为50%的甲醇补足减失的重量，摇匀，滤

5、过，取续滤液，即得。　　2.4阴性对照品溶液的制备　　取处方组成中除赤芍外的其余成分，按“2.3”项处理，制成阴性对照品溶液。　　2.5专属性检查　　吸取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液各10μL注入色谱仪，测定。结果表明，阴性对照品在供试品相应的位置没有干扰。　　2.6线性及范围　　精密称取芍药苷对照品3.62mg，置5mL量瓶中，加甲醇制成0.724mg/mL的贮备液。精密吸取上述贮备液配成一系列对照品溶液（0.01448、0.0362、0.0724、0.1448、0.2896mg/mL），分别精密

6、吸取10μL注入液相色谱中，测定。以芍药苷质量（m）为横坐标，峰面积（A）为纵坐标，回归方程为：A＝11937m＋22.9，r＝0.9999。结果表明芍药苷进样量在0.1448～2.8960范围内线性关系良好。　　2.7精密度试验　　精密吸取对照品溶液（0.0724mg/mL）10μL，重复进样6次，芍药苷峰面积RSD为1.82%。　　图1对照品（A）、样品（B）、阴性（C）HPLC图谱（a为芍药苷峰）（略）　　Fig.1HPLCchromatogramsofcontrol(A),sample(B)andn

7、egativecontrol(C)　　2.8稳定性试验　　分别于0，1，2，3，5，12，24，48h精密吸取同一批号（批号为20070201）供试品溶液10μL，按“2.1”项下测定，结果芍药苷峰面积RSD为1.25%，表明供试品在48h内稳定。　　2.9重复性试验　　取同一批号腰痛片（批号为20070201）6份，按“2.3”项下方法制备，并按“2.1”项色谱条件测定芍药苷的含量。结果芍药苷平均含量为3.57mg/g，RSD为1.93%。　　2.10加样回收率试验3　　取本品（批号为20070201，含

8、量为3.57mg/g）约0.3g，精密称定，加入芍药苷溶液（1.0190mg/mL）1mL，按“2.3”项方法制备，分别测定，计算回收率，结果见表1。　　2.11样品含量测定　　取3批腰痛片分别按“2.3”项方法制成供试品溶液，进样测定芍药苷含量，结果见表2。　　表1芍药苷加样回收率测定结果（n＝6）（略）　　Tab.1Resultsofsamplerecoverytest(n=6)　　表2腰痛片中芍药苷的含量测