hplc法测定清瘟解毒片中芍药苷的含量

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1、HPLC法测定清瘟解毒片中芍药苷的含量【摘要】目的测定清瘟解毒片中芍药苷的含量。方法采用反相高效液相色谱法，DiamonsilC18柱，甲醇0.05mol/LKH2PO4(体积比30∶70)为流动相，流速为1.0mL·min-1，检测波长230nm，柱温为室温。结果芍药苷质量浓度在4.95～59.4μg/mL间具有良好的线性关系(r=0.9997)，芍药苷平均回收率为104.1%，方法精密度(RSD)为0.90%(n=6)。结论该法可用于清瘟解毒片中芍药苷的含量测定。【关键词】清瘟解毒片;芍药苷;高效液相色谱法;含量测定

2、　　Abstract:ObjectiveTodeterminethecontentofpaeoniflorininQingethodforthedeterminationofpaeoniflorininQingatographiccolumnonsilC18.Themobilephaseethanol0.05mol/LKH2PO4(30∶70).ThefloL·min-1,andthedetection.ThecolumntemperatureL(r=0.9997).TheaveragerecoveryforPaeoni

3、florinethodethodcanbeusedinassayofpaeoniflorinofthepreparation.　　Keyg，置200mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液(芍药苷质量浓度为99μg·mL-1)。　　2.1.2供试品溶液的制备取清瘟解毒片样品，研细，取约0.25g，精密称定，精密加水25mL，称定重量，超声处理30min，放冷，摇匀，滤过，弃去初滤液，续滤液0.45μm滤膜过滤，作为供试品溶液。　　2.1.3阴性对照液的制备取处方组成中除赤芍外的其余成分制成不含赤芍的阴性对照

4、品，按“2.1.2”项下的制备方法处理得阴性对照液。　　2.2色谱条件及系统适用性试验　　色谱柱为DiamonsilC18柱(250mm×4.6mm，5μm，迪马公司)，甲醇KH2PO4(体积比30∶70)，流速为1.0mL·min-1，检测波长230nm，柱温为室温。分别取对照品溶液(芍药苷质量浓度为29.7μg·mL-1)、供试品溶液和阴性对照溶液10μL注入色谱仪，理论板数以芍药苷峰计算应不低于4500;芍药苷的拖尾因子为0.94，保留时间约为21.8min，芍药苷与其他组分可基线分离;阴性样品不干扰样品测定(图1

5、)。　　2.3方法学考察　　2.3.1标准曲线制备分别吸取一定量的芍药苷对照品贮备液，加甲醇稀释成芍药苷质量浓度为4.95、9.9、19.8、29.7、39.6、49.5、59.4μg·mL-1的溶液。依次进样10μL，每个浓度测定3次以上。以峰面积(A)对对照品溶液质量浓度(ρ)进行回归，得芍药苷回归方程A=11.20ρ-1.48，r=0.9997。表明芍药苷质量浓度在4.95～59.4μg·mL-1范围内与峰面积线性关系良好。　　2.3.2精密度试验取质量浓度为29.7μg·mL-1的芍药苷对照品溶液10μL连续测定5次

6、，其峰面积的平均值为326.6，RSD为0.89%，表明仪器精密度良好。　　2.3.3稳定性试验取供试品溶液(20060922)在0、2、4、6、8h分别进样10μL，记录峰面积，结果芍药苷峰面积的平均值为334.6，RSD为1.64%，表明供试品溶液在8h内稳定。　　2.3.4重复性试验取同一批号(20060922)样品6份，照“2.1.2”方法提取、测定，结果芍药苷平均含量为2.86mg·g-1，RSD为0.90%。表明分析方法精密度良好。　　2.3.5加样回收试验精密称取同一批号样品(20060922)共6份，加入相应

7、量的芍药苷对照品，照“2.1.2”方法处理并测定，计算回收率，结果芍药苷平均回收率为104.1%，RSD=0.40%，表明本方法准确可靠，见表1。广东药学院学报第25卷第4期易润青，等.HPLC法测定清瘟解毒片中芍药苷的含量表1回收率试验结果　　2.4样品测定　　取清瘟解毒片样品3批，照“2.1.2”方法制备供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液(29.7μg·mL-1)与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，计算样品中芍药苷的含量，结果见表2。表2样品测定结果　　3讨论　　3.1根据芍药苷的溶解性[3],分别以体积分数5

8、0%甲醇[4]、水[5]、体积分数50%乙醇[6]为提取溶剂进行试验，测得芍药苷含量从高到低依次为水、体积分数50%乙醇、体积分数50%甲醇，以水为溶剂含量最高，且达到基线分离，因此以水为提取溶剂。考察了超声提取20、30、40min对提取率的影响，结果表明，超声提取30min含量达最高，