柴胡皂甙d对狼疮肾炎的治疗作用论文

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1、柴胡皂甙d对狼疮肾炎的治疗作用论文【摘要】目的：观察柴胡皂甙d(SSd)对NZB在肾小球的沉积也减少.结论：SSd对NZB(μ链特异性)异硫氰酸荧光素(FITC)直接免疫荧光抗体均购自美国Sigma公司.1.2方法1.2.1实验动物分组将实验动物随机分为3组：SSd治疗Ⅰ组［n=8，SSd腹腔注射，剂量2mg/(kg·d)，浓度0.2g/L］；SSd治疗Ⅱ组［n=6，4mg/(kg·d)，浓度0.4g/L］；空白对照组［Ⅲ组，n=6，腹腔注射无菌生理盐水10mL/(kg·d)］.于实验第6周末处死3组全部小鼠，取血及肾组织标本.1.2.2各组小鼠血尿指

2、标的检测实验的第2，4，6周末，收集各组小鼠尿液，用考马斯亮蓝法检测尿蛋白含量(mg/L)；自动生化分析仪测定血清肌酐(SCr)(μmol/L)；酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清皮质酮(CS)(nmol/L)；ELISA测定血清抗dsDNA抗体(AdsDNA)(A450nm).1.2.3各组小鼠肾组织学检查HE,PAS染色，光镜观察肾组织病变情况，对肾小球和肾小管损伤程度进行评分［3］：每例肾组织观察20个肾小球横断面，对每个肾小球进行半定量评分.计算受损肾小管比例(200个随机选择的肾小管中扩张、萎缩、坏死的肾小管所占的百分比).电镜观察系膜

3、区、内皮下、基底膜内、上皮下是否有电子致密物沉积；上皮细胞足突是否融合［4］.免疫荧光（immunofluorescence,IF）观察肾组织IgA,IgG,IgM的沉积，根据荧光强度来判断免疫复合物的多少，选取10个肾小球用半定量法进行评分［4］.1.2.4肾脏组织IL6和IL10mRNA表达的检测从Nucleotide中查找小鼠IL6,IL10和βactin基因序列，应用PrimerPremier5.0引物设计软件，进行引物设计.①IL6引物序列：上游5′GTGGCTAAGGACCAAGACCA3′，下游5′TTCCAAGAAACCAT

4、CTGGCTA3′；②IL10引物序列：上游5′TCCTTGGAAAACCTCGTTTG3′，下游5′CTTCAATTGCTTCCCAAGGA3′；③βactin引物序列：上游5′GCGCTTTTGACTCAGGATTT3′，下游5′CCTGGGCCATTCAGAAATTA3′.所有引物均由上海生物工程公司合成.采用RTPCR和紫外图像分析技术检测小鼠肾组织IL6，IL10mRNA表达.实验6in后，94℃30s，56.1,57.4,.freelin，30个循环，最后72℃延伸7min.取IL6，IL10和βactinPCR产物各3μL，

5、加样于20g/L琼脂糖凝胶中进行电泳，用凝胶成像系统定量分析DNA含量，以所测得积分吸光度与内参照βactin积分吸光度的比值代表半定量值.统计学处理：计量资料以x±s表示，组间比较采用方差分析，两两比较用SNKq检验(StudentNeanKeuls法).统计结果以P0.05为有统计学意义.所有数据采用SPSS13.0统计软件包处理.2结果2.1尿蛋白含量SSd治疗Ⅰ组和SSd治疗Ⅱ组尿蛋白含量低于空白对照组(P0.05)；SSd治疗Ⅱ组尿蛋白含量低于Ⅰ组(P0.05,表1).表1各组小鼠尿蛋白含量2.2SCr,CS和AdsDNA水平实验6

6、RNA表达实验6RNA表达水平低于空白对照组(P0.05)；SSd治疗Ⅱ组肾组织IL6和IL10mRNA表达水平低于SSd治疗Ⅰ组(P0.05,图3).A：SSd治疗Ⅰ;B：SSd治疗Ⅱ;C：空白对照.表4各组小鼠肾组织IgG,IgA和IgM沉积评分3讨论LN传统治疗方法为糖皮质激素加免疫抑制剂，常不能有效控制病情活动，而且长期大量应用上述药物可增加感染、心力衰竭、肾功能衰竭等并发症的发生.因此，发掘新药、探索有效的治疗方法是亟待解决的问题.柴胡皂甙是中药柴胡的主要成分之一，其最具活性的成分是SSd，很多研究表明SSd具有抗炎、免疫抑制和免疫调节作用

7、.早在1986年，Abe等［5］发现SSd可以显著减少氨基核甙肾病模型大鼠的蛋白尿.此后陆续有学者发现SSd具有减少尿蛋白，抑制细胞增生，改善肾组织病理等作用［6-8］.本研究结果显示，SSd能够减少NZB的沉积明显减少，表明SSd可以干扰和去除原位免疫复合物的形成，从而减轻肾脏炎症发生.本研究还显示SSd不同程度地改善了NZBartinezMJ,SilvanSenAM,etal.Invivoandinvitroantiinflammatoryactivityofsaikosaponins［J］.LifeSci,1998,63(13):1147-115

8、6.［2］LeungCY,LiuL,A,PineraC,SetienMA,eta