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1、柴胡皂甙d对狼疮肾炎的治疗作用论文【摘要】目的:观察柴胡皂甙d(SSd)对NZB在肾小球的沉积也减少.结论:SSd对NZB(μ链特异性)异硫氰酸荧光素(FITC)直接免疫荧光抗体均购自美国Sigma公司.1.2方法1.2.1实验动物分组将实验动物随机分为3组:SSd治疗Ⅰ组[n=8,SSd腹腔注射,剂量2mg/(kg·d),浓度0.2g/L];SSd治疗Ⅱ组[n=6,4mg/(kg·d),浓度0.4g/L];空白对照组[Ⅲ组,n=6,腹腔注射无菌生理盐水10mL/(kg·d)].于实验第6周末处死3组全部小鼠,取血及肾组织标本.1.2.2各组小鼠血尿指
2、标的检测实验的第2,4,6周末,收集各组小鼠尿液,用考马斯亮蓝法检测尿蛋白含量(mg/L);自动生化分析仪测定血清肌酐(SCr)(μmol/L);酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清皮质酮(CS)(nmol/L);ELISA测定血清抗dsDNA抗体(AdsDNA)(A450nm).1.2.3各组小鼠肾组织学检查HE,PAS染色,光镜观察肾组织病变情况,对肾小球和肾小管损伤程度进行评分[3]:每例肾组织观察20个肾小球横断面,对每个肾小球进行半定量评分.计算受损肾小管比例(200个随机选择的肾小管中扩张、萎缩、坏死的肾小管所占的百分比).电镜观察系膜
3、区、内皮下、基底膜内、上皮下是否有电子致密物沉积;上皮细胞足突是否融合[4].免疫荧光(immunofluorescence,IF)观察肾组织IgA,IgG,IgM的沉积,根据荧光强度来判断免疫复合物的多少,选取10个肾小球用半定量法进行评分[4].1.2.4肾脏组织IL6和IL10mRNA表达的检测从Nucleotide中查找小鼠IL6,IL10和βactin基因序列,应用PrimerPremier5.0引物设计软件,进行引物设计.①IL6引物序列:上游5′GTGGCTAAGGACCAAGACCA3′,下游5′TTCCAAGAAACCAT
4、CTGGCTA3′;②IL10引物序列:上游5′TCCTTGGAAAACCTCGTTTG3′,下游5′CTTCAATTGCTTCCCAAGGA3′;③βactin引物序列:上游5′GCGCTTTTGACTCAGGATTT3′,下游5′CCTGGGCCATTCAGAAATTA3′.所有引物均由上海生物工程公司合成.采用RTPCR和紫外图像分析技术检测小鼠肾组织IL6,IL10mRNA表达.实验6in后,94℃30s,56.1,57.4,.freelin,30个循环,最后72℃延伸7min.取IL6,IL10和βactinPCR产物各3μL,
5、加样于20g/L琼脂糖凝胶中进行电泳,用凝胶成像系统定量分析DNA含量,以所测得积分吸光度与内参照βactin积分吸光度的比值代表半定量值.统计学处理:计量资料以x±s表示,组间比较采用方差分析,两两比较用SNKq检验(StudentNeanKeuls法).统计结果以P0.05为有统计学意义.所有数据采用SPSS13.0统计软件包处理.2结果2.1尿蛋白含量SSd治疗Ⅰ组和SSd治疗Ⅱ组尿蛋白含量低于空白对照组(P0.05);SSd治疗Ⅱ组尿蛋白含量低于Ⅰ组(P0.05,表1).表1各组小鼠尿蛋白含量2.2SCr,CS和AdsDNA水平实验6
6、RNA表达实验6RNA表达水平低于空白对照组(P0.05);SSd治疗Ⅱ组肾组织IL6和IL10mRNA表达水平低于SSd治疗Ⅰ组(P0.05,图3).A:SSd治疗Ⅰ;B:SSd治疗Ⅱ;C:空白对照.表4各组小鼠肾组织IgG,IgA和IgM沉积评分3讨论LN传统治疗方法为糖皮质激素加免疫抑制剂,常不能有效控制病情活动,而且长期大量应用上述药物可增加感染、心力衰竭、肾功能衰竭等并发症的发生.因此,发掘新药、探索有效的治疗方法是亟待解决的问题.柴胡皂甙是中药柴胡的主要成分之一,其最具活性的成分是SSd,很多研究表明SSd具有抗炎、免疫抑制和免疫调节作用
7、.早在1986年,Abe等[5]发现SSd可以显著减少氨基核甙肾病模型大鼠的蛋白尿.此后陆续有学者发现SSd具有减少尿蛋白,抑制细胞增生,改善肾组织病理等作用[6-8].本研究结果显示,SSd能够减少NZB的沉积明显减少,表明SSd可以干扰和去除原位免疫复合物的形成,从而减轻肾脏炎症发生.本研究还显示SSd不同程度地改善了NZBartinezMJ,SilvanSenAM,etal.Invivoandinvitroantiinflammatoryactivityofsaikosaponins[J].LifeSci,1998,63(13):1147-115
8、6.[2]LeungCY,LiuL,A,PineraC,SetienMA,eta
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