鳖甲炮制前后对肝星状细胞增殖影响的比较研究论文

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1、鳖甲炮制前后对肝星状细胞增殖影响的比较研究论文施婧妮,胡春玲,唐尹萍,赵刚,刘焱文【摘要】目的比较鳖甲生品和醋制品对大鼠肝星状细胞(HSCT6)增殖的影响，为鳖甲醋制品抗肝纤维化的临床应用提供依据。方法传代培养的HSCT6与鳖甲生品和醋制品超声提取物，鳖甲生品和醋制品回流提取物共同培养72h后，采用MTT比色法测定各浓度组HSCT6的增殖情况。结果两种提取方式相互验证了鳖甲生品和醋制品对HSCT6细胞增殖均有抑制作用，且鳖甲醋制品的作用优于鳖甲生品。结论鳖甲醋制品的抗肝纤维化作用优于鳖甲生

2、品。【关键词】鳖甲;炮制前后;肝星状细胞;MTT法AbstractObjectiveToparetheimfluenceofthecrudeandprocessedTrionyxsinensiscarapaceonrathepaticstellatecellproliferation(HSCT6),thustoguidetheclinicalapplicationofTrionyxsinensiscarapaceonthethetreatmentofliverfibrosis.MethodsSe

3、condarycultureHSCT6invitro,rapactsofTrionyxsinensiscarapaceextractsatdifferentconcentrationsonHSCT6.ResultsThecrudeandprocessedTrionyxsinensiscarapacecanbothinhibitproliferationofHSCT6,andtheantiproliferationeffectsonHSCT6uturallyauthenticatedbyu

4、ltrasonicextractionandrefluxextraction.ConclusionTheprocessedTrionyxsinensiscarapacehasbetterfunctioninantiliverfibrosisthanthecrude.Keyann)的背甲1，始载于《神农本草经》，收载于历年版《中华人民共和国药典》，具有滋阴潜阳.freelpus公司产品;洁净工作台，上海博迅医疗设备厂产品。1.2方法1.2.1鳖甲提取物的制备1.2.1.1鳖甲超声提取物的制备(1)

5、称取醋鳖甲粉(80目)25g，加蒸馏水100ml，超声50min，抽滤，药渣再加50ml蒸馏水，超声50min，抽滤，合并两次滤液，冷冻干燥后得冻干粉，为样品Ⅰ。(2)生鳖甲按上述方法制备得到样品Ⅱ。1.2.1.2鳖甲回流提取物的制备(1)称取醋鳖甲粉(80目)25g，加蒸馏水100ml，100℃回流提取2h，抽滤，药渣再加50ml蒸馏水，100℃回流提取2h，抽滤，合并两次滤液，冷冻干燥后得冻干粉，为样品Ⅲ。(2)生鳖甲按上述方法制备得到样品Ⅳ。1.2.2HSCT6的培养及传代将传代的HSC

6、T6培养于含10%胎牛血清、100u/ml青霉素、100mg/ml链霉素和1%NEAA的HighDMEM培养液中，置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中培养;待细胞在培养瓶中生长至铺满瓶底60%以上面积时，即可用0.25%胰蛋白酶消化30秒至1分钟左右，当细胞开始收缩、间隙增大时立即弃去消化液，静置约30秒至1分钟左右，加入含10%胎牛血清的HighDMEM培养液，轻轻吹打贴壁细胞使之成为均匀的细胞悬液，取10μl细胞悬液光镜下计数，用培养基调整细胞浓度，以1×105/ml传代。1.2

7、.3实验分组及药物处理待细胞长满培养板底后，换用5%胎牛血清的DMEM培养基，培养24h后分别加入高、中、低剂量鳖甲药液(以含5%胎牛血清的DMEM培养基倍比稀释成56.0000mg/ml、28.0000mg/ml、14.0000mg/ml，用0.45μm滤膜过滤)，4孔重复，另设空白对照组(含5%胎牛血清的DMEM培养基)。1.2.4MTT比色法测定HSCT6增殖传代HSCT6细胞按1×105的密度接种于96孔培养板，每孔加100μl，细胞贴壁长满孔底12h后，换含5%胎牛血清的DMEM培养

8、基，培养12h后，加入高、中、低剂量鳖甲药液。每一浓度设4复孔，另设空白对照组，去培养基(翻板)，每孔加20μlMTT溶液;孵育4h，每孔加入DMSO100μl，在微型混合器上振荡2min，10min后于酶标仪上测定OD490值。抑制率=(1-药物组OD值/对照组OD值)×100%1.3统计学处理实验结果以(x±s)表示。应用单因素方差分析，P0.05为差异有显著性。2结果2.1鳖甲生品和醋制品超声提取物对HSCT6细胞增殖的影响传代培养的HSCT6与不同浓度样品Ⅰ、样品Ⅱ共同