鳖甲炮制前后对肝星状细胞增殖影响的比较研究

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1、鳖甲炮制前后对肝星状细胞增殖影响的比较研究作者：施婧妮,胡春玲,唐尹萍,赵刚,刘焱文【摘要】目的比较鳖甲生品和醋制品对大鼠肝星状细胞(HSCT6)增殖的影响，为鳖甲醋制品抗肝纤维化的临床应用提供依据。方法传代培养的HSCT6与鳖甲生品和醋制品超声提取物，鳖甲生品和醋制品回流提取物共同培养72h后，采用MTT比色法测定各浓度组HSCT6的增殖情况。结果两种提取方式相互验证了鳖甲生品和醋制品对HSCT6细胞增殖均有抑制作用，且鳖甲醋制品的作用优于鳖甲生品。结论鳖甲醋制品的抗肝纤维化作用优于鳖甲生品。【关键词】鳖甲;炮制前后;肝星状细胞;MTT法　　[Abstract]Objective

2、ToparetheimfluenceofthecrudeandprocessedTrionyxsinensiscarapaceonrathepaticstellatecellproliferation(HSCT6),thustoguidetheclinicalapplicationofTrionyxsinensiscarapaceonthethetreatmentofliverfibrosis.MethodsSecondarycultureHSCT6invitro,rapactsofTrionyxsinensiscarapaceextractsatdifferentconcentrat

3、ionsonHSCT6.ResultsThecrudeandprocessedTrionyxsinensiscarapacecanbothinhibitproliferationofHSCT6,andtheantiproliferationeffectsonHSCT6uturallyauthenticatedbyultrasonicextractionandrefluxextraction.ConclusionTheprocessedTrionyxsinensiscarapacehasbetterfunctioninantiliverfibrosisthanthecrude.　　

4、[Keyann)的背甲[1]，始载于《神农本草经》，收载于历年版《中华人民共和国药典》，具有滋阴潜阳，软坚散结，退热除蒸的功效，是治疗肝纤维化疾患的常用中药。以鳖甲配伍组方的中药复方制剂复方鳖甲软肝片、鳖甲抗纤方、鳖甲煎丸等均具有较好的抗肝纤维化作用[2～4]。肝纤维化是慢性肝病发展至肝硬化甚至原发性肝细胞癌的必经阶段，是各种慢性肝病的共同病理学基础[5]。在肝纤维化形成的过程中，肝星状细胞(HSC)的“持久化”激活和增殖是中心环节[6];阻抑激活的HSC增殖和诱导促进HSC凋亡是防治肝纤维化的重要措施[7]。关于鳖甲药材的现代临床应用，有人主张生品入药，有人推崇醋制品，莫衷一是。因此，探

5、讨鳖甲炮制前后对HSC增殖的影响，对于指导鳖甲在临床上用于治疗肝纤维化疾患具有重要的现实意义。本实验采用两种提取方式，分别对鳖甲炮制前后的肝星状细胞增殖抑制作用进行了比较研究。　　1材料与方法　　1.1材料　　1.1.1大鼠肝星状细胞系(HSCT6)浙江大学附属第一医院肝病研究所提供。　　1.1.2试验药物及主要试剂(1)试验药物：鳖甲由浙江衢化医院提供，按2005版《中国药典》净制(生品)和醋制(醋制品)，粉碎后过80目筛。(2)细胞培养试剂：胰蛋白酶(trypsin)、非必需氨基酸(NEAA)、HighDMEM培养基，GIBCO公司产品;胎牛血清，武汉三利生物技术有限公司产品;青霉

6、素、链霉素，华北制药股份公司产品;二氧化碳(CO2)，武汉市明辉气体科技有限公司。(3)细胞增殖用试剂：二甲基亚砜(DMSO)、噻唑蓝(MTT)，武汉凌飞科技有限公司。　　1.1.3仪器CO2培养箱，日本SANYO公司产品;全自动酶标仪，美国BioRad公司产品;倒置相差显微镜，日本Olympus公司产品;洁净工作台，上海博迅医疗设备厂产品。　　1.2方法　　1.2.1鳖甲提取物的制备　　1.2.1.1鳖甲超声提取物的制备(1)称取醋鳖甲粉(80目)25g，加蒸馏水100ml，超声50min，抽滤，药渣再加50ml蒸馏水，超声50min，抽滤，合并两次滤液，冷冻干燥后得冻干粉，为样品Ⅰ。

7、(2)生鳖甲按上述方法制备得到样品Ⅱ。　　1.2.1.2鳖甲回流提取物的制备(1)称取醋鳖甲粉(80目)25g，加蒸馏水100ml，100℃回流提取2h，抽滤，药渣再加50ml蒸馏水，100℃回流提取2h，抽滤，合并两次滤液，冷冻干燥后得冻干粉，为样品Ⅲ。(2)生鳖甲按上述方法制备得到样品Ⅳ。　　1.2.2HSCT6的培养及传代将传代的HSCT6培养于含10%胎牛血清、100u/ml青霉素、100mg/ml链霉素和1