鳖甲煎丸和罗格列酮药物血清对tgfβ1刺激大鼠肝星状细胞增殖的影响和预防作用

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1、河北医科大学硕士学位论文鳖甲煎丸和罗格列酮药物血清对TGFβ1刺激大鼠肝星状细胞增殖的影响和预防作用姓名：王卜申请学位级别：硕士专业：中西医结合临床指导教师：孙玉凤201203中文摘要鳖甲煎丸和罗格列酮药物血清对TGF131刺激大鼠肝星状细胞增殖的影响和预防作用摘要肝硬化(cirrhosisofliver)是一种慢性、进行性、弥漫性肝病，由各种病因引起肝细胞弥漫性坏死、再生，诱发纤维结缔组织增生，导致小叶结构破坏和假小叶重建，造成肝硬化。引起肝硬化的原因很多，不同地区的主要病因也不尽相同，欧美以酒精性肝硬化为主，我国则以肝炎肝

2、硬化最多见。在世界范围内，肝硬化己成为仅次于心脑血管病和恶性肿瘤的重大疾病，对人类危害极大。肝纤维化(hepaticfibrosis，HF)是多种慢性肝病发展中共同的病理基础，也是由慢性肝炎向肝硬化进展的重要环节。肝脏细胞外基质(extracellularmatrix，ECM)的合成多于分解并在肝组织内过度沉积是肝纤维化形成的原因，一方面是肝星状细胞(hepaticstellatecells，HSC)的活化和向成纤维细胞与肌成纤维样细胞的转变，导致大量ECM的合成，另外一方面因为ECM的降解减少导致其降解与合成的失衡促进加强了

3、肝纤维化的形成。所以肝纤维化是各种慢性肝病发展为肝硬化的必经阶段，若病因不被消除，肝纤维化将逐渐加重，逐渐使血管和肝小叶等被改建，使正常结构的肝脏收到破坏，假小叶、纤维间隔在中心静脉区和汇管区出现形成，发展成为不可逆转的肝硬化。转化生长因子p1(transforminggrowthfactorp1，TGF．B1)，是目前发现的最重要的致纤维化细胞因子，是架设HSC和肝纤维化之间的桥梁。当各种致病因素持续作用于肝脏时，通过激活HSC的一系列机制，从而造成肝纤维化并进展为肝硬化。HSC的激活可分为两个阶段：启动阶段和激活阶段。启动

4、激活阶段改变早期表型和基因，使HSC对细胞因子如TGF．13l以及ECM和脂质过氧化物改变产生应答等非细胞因子的刺激；激活阶段主要是细胞因子激发产生局部损伤，维持纤维化的形成和表型的激活。TGF—B1可促进HSC活化，同时增强分泌细胞黏合素、层粘连蛋白、纤维连接蛋白、I、III、Ⅳ型胶原和HSC表达，并通过自分泌因素的作中文摘要用加强TGF．t31的自身表达，另外还可抑制纤溶酶原激活物和基质分解素和胶原酶等基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinases，MMPs)的表达，同时促进内皮细胞和HSC表达金属蛋白酶

5、组织抑制物(tissueinhibitorofmetalloproteinase，TIMPs)和纤溶酶原激活物抑制因子。因此，在肝纤维化的发展过程中TGF．131起着重要的始动作用和激活作用，为抗纤维化治疗中抑制TGF．131的表达奠定了理论指导基础。参与TGF．13信号细胞内转导的相关蛋白统称为Smad信号蛋白家族，为TGF一13下游信号传导分子的统称。其中Smad2、Smad3、Smad4、Smad7参与TGF．13信号转导途径。Smad7是TGF．13／Smad信号转导通路中的主要抑制性调控蛋白，对TGF．131信号转导

6、途径的反馈和交叉调控起关键作用，因此调控Smad7抑制TGF—B1信号转导的表达为肝纤维化的防治提供了新的途径。西药罗格列酮为过氧化物酶体增殖物活化受体Y(peroxisomeproliferators．activatedreceptorgamma，PPARY)的合成配体，为PPARy激动剂，研究证实PPARY活化可以抑制ECMmRNA的表达，使ECM合成减少，PPARY还可以通过抑制TGF—Bl活化HSC的通路，促进HSC凋亡，从而延缓肝纤维化。在中药方面治疗肝纤维化亦取得一定效果，中药具有多环节、多层次、多靶点的综合药理学

7、作用，且其具有对肝纤维化的良好预防及对人体的低毒性反应等特点。鳖甲煎丸以往研究证实具有抑制胶原合成及HSC活化增殖，并改善肝功能的作用。但中药复方成分复杂，如直接加入体外反应体系，其非特异性理化因素会严重干扰实验。所以本研究采用血清药理学方法，对正常大鼠提取药物血清进行体外细胞实验，探讨鳖甲煎丸的抗肝纤维化的作用机制。目的：通过观察不同浓度鳖甲煎丸药物血清对TGF．91刺激的大鼠HSC活化增殖、ECM合成及TGF一91／smad信号转导通路的影响，探讨其抗纤维化作用及可能作用机制，并与西药罗格列酮相比较。方法：l采用血清药理学

8、方法制备大鼠药物血清：先配置TGF．pl浓度为5ug／L的DMEM培养液。并分别制备含2．5％，7．5％，12．5％甲煎丸药物血清，TGF．91浓度为5ug／L的DMEM培养液分别作为中药低、中、高预防组干预培养基；制备含7．5％罗格列酮药物血清，TGF．p1浓度为5ug／L