鳖甲煎丸与罗格列酮对由tgf-β1刺激的大鼠肝星状细胞活化和tgf-βsmad信号转导通路的影响

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1、河北医科大学硕士学位论文鳖甲煎丸与罗格列酮对由TGF--β1刺激的大鼠肝星状细胞活化和TGF--β/Smad信号转导通路的影响姓名：王宇涵申请学位级别：硕士专业：中西医结合临床指导教师：孙玉凤201203中文摘要——————————————————————————————————————————～_鳖甲煎丸与罗格列酮对由TGF．p1剌激的大鼠肝星状细胞活化和TGF．p／Smad信号转导通路的影响摘要目的：肝纤维化(hepaticfibrosis，I-IF)是各种致病因素引起的肝损伤的修复反应，同时又是慢性肝病进展成肝硬化的共同病理基础及必经阶段。我国是肝病高发国家，以慢

2、性乙型肝炎、丙型肝炎最常见，严重影响我国人民平均寿命和生活质量，故阻止或逆转肝纤维化进程是治疗慢性肝病、改善预后的重要手段。肝纤维化主要特征是细胞外基质(extracellularmatrix，ECM)合成增多、降解减少，从而在肝内过度沉积。肝星状细胞(hepaticstellatecells，HSC)是肝脏合成ECM的主要来源细胞，其激活、增殖后表达各种信号转导蛋白，合成大量ECM，是形成肝纤维化的中心环节。TGF．131是目前已知的功能最明确和作用最强的促肝纤维化细胞因子，在促进HSCs合成分泌ECM中发挥重要作用。TGF．D1与HSCs表面具有高亲和力的TGF．p

3、受体(TGF．preceptor，TBR)结合形成TGF．p1一TpR复合体，而后进一步磷酸化下游信号因子一Smad蛋白，将信号转入细胞核内，启动HSCs活化增殖。随着肝纤维化发生机制的不断阐明，中西医都在进行防治肝纤维化的有益探索。一些西药的研究取得了一定进展，如过氧化物酶体增殖物活化受体7(peroxisomeproliferators．activatedreceptorgamma．PPAR7)，是一种配体激活的核受体转录因子，静止状态HSC表达PPARy，而活动状态的HSC表达PPAR?明显减少，PPAR7表达减少与HSC激活密切相关。目前认为罗格列酮是PPAR7

4、的配体，作为PPAR7的激动剂，可增加肝内胶原酶活性，减少肝内胶原积聚和抑制HSC的增殖。在中医药方面，以活血化瘀为主的中医药(traditionalChinesemedicine，TCM)治疗肝纤维化亦取得一定效果，中药对肝纤维化有良好的预防和治疗作用，且具有多环节、多层次、多靶点的综合药理学特点及低毒副作用的优点。鳖甲煎丸以往系列研究证实具有抑制胶原合成及HSC活化增殖、改善肝功能的作用，但作用机制尚未明确。本项研究采用中药血清药理学的方法，通过观察不同浓度鳖甲煎丸药物血清对TGF．p1刺激的大鼠HSC活化增殖、TGF．p1／Smad信号转导通路及ECM合成的影响，

5、中文摘要l————————————————————————————————————————————————_———一探讨鳖甲煎丸抗肝纤维化作用及可能机制，并与罗格列酮相比较。方法：1采用血清药理学方法制备大鼠药物血清，将25只大鼠按体重随机分为五组，鳖甲煎丸与罗格列酮均用无菌蒸馏水制备药物混悬液，鳖甲煎丸分别按成人剂量的3．5、7、14倍灌胃给药，作为中药低、中、高剂量组；罗格列酮按成人剂量的7倍灌胃给药，作为西药组；对照组灌服等体积蒸馏水。给药7次后下腔静脉取血，制备药物血清，配置10％大鼠含药血清的FBS．DMEM培养液作为药物治疗组：10％正常大鼠血清的FBS—D

6、MEM培养液作为对照组，含5ug／LnlTGF．D1的10％正常大鼠血清的FBS．DMEM培养液作为模型组。模型组和四个治疗组分别加入模型组培养液24h后，吸去上清液，再加入对照组和各治疗组药物血清培养液继续培养。2药物血清体外培养HSC及指标检测：应用HSC细胞株体外培养技术，在37℃细胞培养箱中，待细胞在啪M培养液中贴壁后，换用无血清DMEM同步化培养24h，再换用各组干预培养基按上述方法干预细胞24h，进行指标检测：①吸光度(opticaldensity，OD)：MTT法(g)CollV，LN：放射免疫法⑨T[3RI、T[3RII、Smad3、Smad7：反转录聚

7、合酶联反应(RT—PCR)。结果：1MTT结果显示：与对照组相比，模型组及除鳖甲煎丸高剂量组之外的各药物干预组OD值明显增高(PO．05)，鳖甲煎丸低剂量组OD值明显增高(P<0．05)；鳖甲煎丸低、中、高剂量组OD值依次减低(P<0．05)；鳖甲煎丸高剂量组和对照组OD值无统计学差异(P>O．05)。2放免结果显示：与对照组相比，模型组及各药物干预组CollV