tgf-β1对肝星状细胞的活化作用及机制

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1、遵义医学院硕士学位论文TGF--β1对肝星状细胞的活化作用及机制姓名：宋伟申请学位级别：硕士专业：内科学指导教师：刘春英201205遵义医学院硕士学位论文中文摘要TGF．Bl对肝星状细胞的活化作用及机制中文摘要目的：研究转化生长因子一pl(transforminggrowthfactor-p17TGF．p1)对肝星状细胞(hepaticstellatecells，HSCs)活化的影响及机制，进一步揭示肝纤维化的发病机理，为肝硬化防治提供新的靶点。方法：在培养的肝星状细胞系中加入不同浓度的TGF．B。(终浓度分别为O．2、1．0、5．0ng／m1)培养4

2、8h。常规细胞免疫组化(SABC法)检测肝星状细胞a．平滑肌肌动蛋白(Q．smoothmuscleactin，(It．SMA)的表达；高效液相色谱法(highperformanceliquidchromatography，HPLC)测定细胞培养液非对称性二甲基精氨酸(asymmetric．dimethylarginine，ADMA)的含量，HPLC测定细胞冻融液代谢ADMA的能力反映二甲基精氨酸一二甲胺水解酶(dimethylargininedimethylaminohydrolase，DDAH)的活性；逆转录．PCR(RT-PCR)法检测肝星状细胞D

3、DAHlmRNA表达水平，研究TGF．pl对HSC的激活作用是否与DDAH／ADMA通路有关。结果：l、免疫组化结果显示TGF．pl可呈浓度依赖性增加肝星状细胞Q．SMA的表达水平，促进HSC的活化。2、RT-PCR检测肝星状细胞DDAHlmRNA的变化，可发现TGF．D1呈浓度依赖性下调DDAHlmRNA表达。3、利用高效液相色谱法发现，随着TGF．pl作用浓度增加，DDAHl活性逐渐降低，ADMA合成逐渐增加。结论：1、TGF．13l对活化型的HSC依然具有较强的活化作用，且这种作用具有一定浓度依赖性。2、DDAWADMA通路存在于HSC。3、TG

4、F．pl对HSC的活化作用可能与DDAH／ADMA通路有关。关键词：转化生长因子．B1；TGF．pl；肝星状细胞；非对称性二甲基精氨酸；二甲基精氨酸．二甲胺水解酶遵义医学院硕士学位论文英文摘要Effectoftransforminggrowthfactor-[BlontheactivationofhepaticstellateceHsanditsmechanismAbstractobjective：Tovestigatetheeffectoftransforminggrowthfactor-131(TGF-p1)ontheactivationofhep

5、aticstellatecells(HSCs)anditsmechanism，furtherrevealthepathogenesisofliverfibrosis，andprovidethenewtargetsforcirrhosisoftheliver．Methods：HepaticstellatecellslineswithdifferentconcentrationofTGF一13,(finalconcentrationwere0．2，1．0，and5．0ng／m1)wereculturedfor48h．ExpressionofGt—smoot

6、hmuscleactin(n—SMA)inHSCsweremeasuredbyconventionalcellsimmunohistochemistry(SABC)．Thecontentofasymmetricdimethylarginine(ADMA、incellcultureswasmeasuredbyhighperformanceliquidchromatography(HPLC)．Activityofdimethylargininedimethylaminohydrolase(DDAH)inHSCswasestimatedbydirectlym

7、easuringtheamountofADMAmetabolizedbytheenzyme．MessengerRNAlevelsofDDAHIintheHSCsweremeasuredusingRT-PCR,researchingTGF-p1totheHSCs’activationfunctionandwhetherDDAH／ADMApathwaysinvolved．Results：1．ImmunohistochemicalresultsshowthatTGF—B1canincreaseexpressionlevelsofa—SMAinaconcent

8、ration-dependentmanner．andpromotetheHSCs7activa