小鼠肝星状细胞对肝脏干细胞增殖及代谢的影响-论文.pdf

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1、·988·华实验外科杂志2014年5月第31卷第5期ChinJExpSurg，May2014．Vo1．31，No．5·实验研究·小鼠肝星状细胞对肝脏干细胞增殖及代谢的影响常文举宋陆军徐兴远王洪山高晓东牛伟新秦新裕【摘要】目的应用小鼠肝星状细胞(HSC)与小鼠成体肝脏干细胞(AHPC)体外间接共培养模型，观察HSC旁分泌途径对AHPC增殖及代谢功能的影响。方法分别建立HSC及AHPC细胞分离及培养模型。进一步选择Transwell6孑L板，建立小鼠HSC与AHPC间接共培养模型。存共培养24h和96h后，计算AHPC克隆数及克隆形成率；共培养14d后，

2、行5一溴脱氧尿嘧啶核苷(5-BrdU)增殖实验，计算AHPC细胞克隆内BrdU阳性的细胞数，评估细胞增殖能力。同时，收集细胞上清液行酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞代谢产物以评估细胞的代谢能力。通过以上方法比较HSC组和空白对照组中AHPC在克隆形成率、细胞增殖及代谢功能上的差异。结果HSC组AHPC的克隆形成率为(26．88±3．31)％，对照组为(20．11±2．34)％(P<0．05)。BrdU增殖实验提示，对照组内BrdU／白蛋白双阳性细胞为(69．50±18．81)／N倍视野，较HSC组增多61．29％(P<0．01)。代谢功能方面，

3、HSC组AHPC细胞上清液中自蛋白(Albumin)和尿素(Urea)的浓度分别为(14．17±3．14)mg／(L·d)和(34．83-4-l1．41)mg／(L·d)，比对照组分别提高72．17％和66．89％(P<0．05)。结论一定数量的HSC在体外培养时能提高AHPC克隆形成率，促进细胞增殖分，细胞代谢功能亦相应增强。【关键词】肝星状细胞；肝脏干细胞；共培养；增殖；代谢Mousehepaticstellatecellsregulateproliferationandmetabolismofadulthepaticprogentiorceil

4、sinvitroChangWenju，SongLujun，XuXingyuan，WangHongshan，GaoXiaodong，NiuWeixin，QinXinyu．DepartmentofGeneralSurgery，ZhongshanHospital，FudanUniversity，Shanghai，200032，ChinaCorrespondingauthor：QinXinyu。Email：qin．xinyu@gs—hospita1．sh．cn【Abstract】0bjectiveApplingco—culturemodeltoobserve

5、theeffectofhepaticstellatecells(HSC)paracrinepathwayontheproliferationandmetabolismofadulthepaticprogentiorcell(AHPC)．MethodsEstablishingHSCandAHPCindirectso—culturemodelwithTranswellsix—holeplate．At24hand96hafterco—culture，AHPCcloneformationratewasanalyzed；14daysafterco—cultur

6、e，BrdUprolif-erationassaywasdonetoassesscellproliferationability．Inaddition，thecellsupernatantwascollectedforenzymelinkedimmunosorbentassay(ELISA)todetectionofeel1metabolism．ResultsInHSCgroup．theclonerateofAHPCwasaveraged(26．88±3．31)％．comparedwiththecontrolgroupwas(20．11±2．34)％

7、(P<0．05)．Incontrolgroup，BrdU／Albumindoublepositiveceilswere(69．50±18．81)／FOV，andHSCgroupincreased61．29％(P<0．O1)．InHSCgroup，themetabolicconcentrationofAlbuminandUreaoftheAHPCsupernatantwere(14．17±3．14)mg／(L·d)and(34．83-4-11．41)mg／(L·d)，increasedby72．17％(P<0．01)and66．89％(P<0．05)，

8、respectively，comparedtothecontrolgroup．ConclusionAcert