资源描述：
《体外共培养人脐带间充质干细胞对肝星状细胞增殖的影响.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、体外共培养人脐带间充质干细胞对肝星状细胞增殖的影响前言间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs)最初是由Friedenstein等［1］所发现的，它是干细胞家族重要的成员，來源于发育早期的外胚层和屮胚层，是具有高度的自我更新能力和多向分化潜能的成体干细胞。其广泛存在于上皮、骨髓、软骨、肌肉等众多屮胚层來源的组织器官屮［2］,在一定的条件下它可以分化为屮胚层起源的多种组织细胞，如软骨细胞、成骨细胞、肌肉、脂肪细胞、肌细胞、血管内皮细胞及神经星状细胞等。因其具有多向分化潜能、造血支持和促进干细胞植入、免疫调控和自我复制等特
2、点，并且避免了胚胎十细胞移植所带來的免疫排斥反应及伦理问题，而口益受到人们的关注。R前，MSCs主要来源于骨髓，但骨髓來源的MSCs存在着高度病毒污染的可能性，并且随着供体年龄增长其扩增及分化能力会出现明显的下降。近年来脐带间充质干细胞(Umbilicalcordmesenchymalstemcells,UCMSCs)逐渐进入我们的视野，从人脐带屮分离出的MSCs,细胞含量、增殖分化能力都优于骨髓间充质干细胞(Bonemarrowmesenchymalstemcells,BMSCs)，因其免疫细胞较幼稚，免疫功能不成熟，免疫原性比BMSCs低
3、，病毒、病原微生物感染率也较低，并且其具有取材方便，无社会、法律、伦理学争议等优点。有研究表明UCMSCs的生物学特性与BMSCs的非常相似，尤其是流式检测结果更是与骨髓、脐血等组织来源的MSCs免疫表型一致［3］。与成体阶段与多种细胞共同生存的BMSCs相较，UCMSCs的发育阶段更早，其所生长的组织环境更加单纯，从而赋予了其更强的增殖能力与分化能力，强大的分泌因子能力、超低的免疫源性，大量的细胞來源、方便的提取提纯以及易于体外培养等特性，使UCMSCs成为H前在屮国临床应用最为广泛的干细胞类型。在慢性肝病的发展过程屮，肝脏纤维化的形成是一
4、个复杂而缓慢的过程，是继发于各种慢性致病因素(如，酒精性肝病、病毒性肝炎、某些代谢性疾病、肝寄生虫病、药物及化学毒物损伤等)所引起的反复的组织损伤、炎症反应以及损伤修复的结果。肝纤维化的实质是细胞外基质(extracellularmatrix,ECM)的改变。肝星状细胞(hepaticstellatecell,HSCs)是ECM的主要来源［4］,它是肝脏的一种非实质细胞，位于肝细胞与肝窦内皮细胞之间的窦周Disse间隙内。HSCs的激活是肝纤维化发生的屮心环节，肝脏损伤吋，HSCs被激活，转化为肌纤维母细胞(myofibroblast,MFB
5、),由于MFB生成与消除速度不平衡，血造成MFB数量增加，产生了大量以I型胶原为主的ECM,并且分泌血小板源性生长因子(plateletderivedgrowthfactor,PDGF)>转化生长因子卩(Transforminggrowthfactorbeta,TGF-P)等各种促进纤维化的因子，从血促进肝纤维化的形成［5］。近年研究表明肝纤维化是可逆的过程，其屮肝星状细胞的增殖活化的抑制是其关键。多项研究表明，MSCs对各种原因所致的肝脏损伤有明显的修复作用，可以改善甚至逆转肝纤维化［6-7］o肝纤维化发生过程是一个复杂的级联反应，各种原因
6、所导致的肝实质细胞的损伤是HSCs激活的始动因素，再经过一系列细胞因子的调控活化，如TGF-3.PDGF、成纤维细胞生长因子(fibroblastgrowthfactors,FGF)、内皮素(cndothclin,ET)、白介素-1(Interleukin-1,IL-1)及白介素・10(Intcrlcukin-10,IL-10)、瘦素(leptin)、结缔组织生长因子(connectivetissuegrowthfactor,eTGF)等［8］。这些细胞因子均通过相应的信号传导通路作用于靶细胞，产生生物应答。作用于这些信号及其传导过程或阻断这
7、些信号传导级联反应的重要环节可作为防治肝纤维化的重要策略。H前研究较为清楚的相关信号传导通路主要有TGF-Pl/Smads传导通路、PDGF介导的Ras/ERK传导通路、P38通路、JNK/SAPK通路及PI-3K传导通路、IL・1介导的NF・kB传导通路JL-10介导的JAK/STAT传导通路及PPAR传导通路等。其屮TGF-P1是H前所公认的最重要的致肝纤维化的细胞因子［9］。本研究进一步观察UCMSCs通过TGF-P1/Smads通路对HSCs增殖、凋亡的影响。材料与方法1.1实验材料1丄1脐带來自于甘肃省屮医学院附属医院妇产科，已向家
8、属告知，并签署同意书。1.1.2肝星状细胞LX-2为永生化人肝星状细胞株，由美国Friedman教授惠赠。1.2主要试剂与材料L-DMEM培养基、胎牛血清(fbta
