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时间:2018-11-11
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1、青藤碱对糖尿病大鼠脑缺血再灌注损伤P作者:周素娴 苏珂 于健 彭鹰 周燕 林枫 李浩【摘要】目的探讨青藤碱(sinomenine,Sin)对糖尿病大鼠脑缺血再灌注损伤P-选择素和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响。方法采用高脂高糖饮食加腹腔注射小剂量链脲霉素建立糖尿病大鼠模型,造模成功后将大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、Sin低剂量治疗组和Sin高剂量治疗组。线栓法建立局灶性脑缺血再灌注模型。Sin低(30mg/kg),高剂量(60mg/kg)治疗组于术前30min分别给予大鼠腹腔注射。用免疫组化法观察缺血90min再灌注24h大鼠额顶部
2、皮质P-选择素和ICAM-1表达,进行2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色和HE染色观察脑梗死体积及病理形态学变化。结果①糖尿病大鼠脑缺血再灌注24h,P-选择素和ICAM-1表达均明显增加,与假手术组比较,差异具有显著性(均P<0.05);与缺血再灌注组比较,Sin高、低剂量治疗组均显著减少P-选择素和ICAM-1表达(均P<0.05),高、低剂量组之间差异亦具有显著性(P<0.05)。②Sin治疗组脑梗死体积较缺血再灌注组减小,高、低剂量组之间差异亦具有显著性(P<0.05)。③Sin高、低剂量治疗组脑组织缺血损伤病理
3、学改变明显轻于缺血再灌注组,Sin高剂量治疗组缺血改变亦轻于低剂量治疗组。结论Sin对糖尿病大鼠缺血再灌注脑损伤具有保护作用,其机制可能与减轻脑缺血再灌注损伤阶段P-选择素和ICAM-1所介导的炎症反应有关。【关键词】缺血再灌注;P-选择素;细胞间黏附分子-1;青藤碱 Abstract:ObjectiveTostudytheeffectofsinomenine(Sin)onexpressionofP-selectinandICAM-1folloiareperfusion(I/R)injuryindiabeticrats.MethodsInthisex
4、periment,ratmodelofdiabetesmellitusadebyhighsucrose,fatdietandstreptozotioninjection.Diabeticratslydividedinto4groups:shamoperatedgroup,I/Rgroup,loiddlecerebralarteryocclusion(MCAO)modeladebysuture-occludedmethod.Sininbeforefocalcerebralischemiaoperationrespectively.After90minMC
5、AOfollomunohistochemistryinischemicfrontalandparietalcortex.HEstainingandTTCstainingoperatedgroup,expressionofP-selectinandICAM-1icterritory(P<0.05).paredeinloicimpairmentinloayreducecerebralischemia-reperfusioninjurybydecreasingtheexpressionofP-selectinandICAM-1indiabeticrat
6、s. Keyia-reperfusion;P-selectin;ICAM-1;Sinomenine 目前研究表明,糖尿病是卒中的独立危险因素之一,而并发缺血性卒中的病死率可增高3倍[1]。笔者前期研究证实[2],脑缺血再灌注后炎症反应是造成再灌注损伤的主要原因之一。青藤碱(sinomenine,Sin)是从中药青风藤SinomeniumacutumRehdet-1)有抑制作用,但是否对糖尿病大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤P-选择素和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达有影响尚未见报道,本实验对此进行了相关研究。 1材料健康-1的免疫组化染色 再灌
7、注24h,各组随机取5只大鼠,用生理盐水和多聚甲醛进行心脏灌流固定,断头取脑。在左侧大脑半球距离嗅球尖端7~11mm之间冠状切取约5mm厚脑组织块,固定、脱水、包埋成腊块,连续切片,厚5μm。连取5张,1张作HE染色,其余4张作免疫组化染色。用SP法进行P-选择素和ICAM-1的免疫组化染色。一抗由武汉博士德生物工程公司提供。阴性对照片用PBS液代替一抗。在显微镜下以血管内皮细胞表面出现棕黄染色代表P-选择素和ICAM-1阳性反应血管为阳性结果。高倍镜(400×)下分别随机选取左侧大脑半球额顶部皮质5个不重复视野,计数P-选择素和ICAM-1表达的阳性
8、血管数,5个视野相加即作为每张切片阳性血管数的代表。 2.4TTC染色 再灌注24h,大鼠
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