麻黄碱对脑缺血再灌注损伤大鼠脑内星形胶质细胞gf

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1、麻黄碱对脑缺血再灌注损伤大鼠脑内星形胶质细胞GF【摘要】目的探讨大鼠脑缺血再灌注损伤后麻黄碱治疗对星形胶质细胞胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)表达水平的影响。方法雄性SD大鼠60只，随机分为假手术组、自然恢复组和治疗组。应用线栓法建立单侧大脑中动脉缺血再灌注模型，术后1、2、3、4周应用免疫组化观察缺血周围区GFAP的表达。结果自然恢复组和治疗组术后1周GFAP表达开始增加，3周后表达平稳。治疗组GFAP的表达水平在前两个时间点高于自然恢复组(P<0.05)。结论麻黄碱对脑缺血再灌注损伤大鼠缺血周围区星形胶质细胞增殖活化有促进作用。【关键词】麻黄碱；脑缺血再灌注

2、；星形胶质细胞；胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)；大鼠　　ABSTRACT:ObjectiveToinvestigatetheeffectsofephedrineonglialfibrillaryacidicprotein(GFAP)expressionaftercerebralischemia-reperfusioninjuryinrats.MethodsAltogether60maleSDratslydividedintosham-operationgroup,naturalrecoverygroupandephedrinetreatmentgroup.Theun

3、ilateralischemia-reperfusionmodelsethod.TheexpressionlevelofGFAParoundischemicareainedbyimmunohistochemicaltechniqueatentgroupandnaturalrecoverygroup.Thereentgroupparedepoints.ConclusionEphedrinetreatmentfacilitatestheactivationandproliferationofastrocytesinducedbycerebralischemia-repe

4、rfusioninjury.　　KEYCAO模型的制备　　大鼠麻醉后，仰卧位固定于手术台上，行颈前正中纵行切口，分离暴露右侧颈总动脉(CCA)、颈外动脉(ECA)和颈内动脉(ICA)，剥离迷走神经，结扎CCA近端和ECA根部。在CCA距分叉部约2mm处剪开一小口，将制备好的栓线插入CCA并伸入到ICA内,推进深度约为18-20mm，微遇阻力时停止。栓线经过CCA分叉处和ICA进入颅底至较细的大脑前动脉(ACA)，阻断于同侧颈内动脉、大脑前动脉及大脑后动脉的血流供应，完成对右侧MCA的阻塞。缺血2h后取出栓线实现再灌注。假手术组不插入栓线，其余步骤和手术组相同。　　1

5、.3施加处理因素　　术后治疗组每天给予一次1mg/kg麻黄碱腹腔注射，其余两组注射同体积的生理盐水。　　1.4取材与切片　　各时间点麻醉动物，40g/L多聚甲醛灌注固定后取脑，收集前囟前1mm至前囟后1mm脑标本，经浸蜡、包埋后，连续冠状切片。　　1.5免疫组化检测GFAP的表达　　GFAP抗体、SP试剂盒及DAB试剂盒均购于北京中山试剂公司。切片脱蜡至水，30mL/LH2O2室温下孵育10min，PBS充分漂洗，枸椽酸缓冲液微波修复，自然冷却至室温后PBS充分漂洗，加入山羊封闭血清，室温孵育10min，甩干后加入GFAP抗体(1∶150)，37℃孵育2h，PBS充

6、分漂洗后加入生物素标记的二抗工作液，37℃孵育30min，PBS充分漂洗后加入辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素工作液，37℃孵育30min，PBS漂洗后DAB显色液室温下显色，约3min，蒸馏水冲洗以终止反应。脱水、透明、封片。用PBS代替GFAP抗体作阴性对照。　　1.6图像分析和统计学处理　　应用积分吸光度值反映免疫反应产物的相对含量。每张切片在梗死周围区随机选取6个400倍视野拍照，应用GD-8型病理影像分析系统测定每视野各阳性区吸光度，并求出各阳性区吸光度的积分和，得到积分吸光度值。每例标本的被检各区测3张切片，取其均值。采用SPSS11.5软件进行统计分析。

7、数值以均数±标准差表示，比较采用单因素方差分析，两组间的比较在方差齐时选用LSD法、方差不齐时采用Tamhane’s法检验，P<0.05为差异有统计学意义。　　2结果GFAP免疫组化阳性细胞表现为胞核不着色，胞质及突起染成棕褐色，阳性产物随细胞突起分布，显示出细胞的蜘蛛状分支轮廓。假手术组：在皮层分布数量稀少，胞体较小，分支纤细，两侧半球对称。积分吸光度值同组不同时点之间比较，无显著性差异(图1A，表1)。自然恢复组：胞体增大、分支增粗，阳性细胞明显增多；在缺血中心区未见GFAP表达，同组比较缺血周围区GFAP的表达在1周时显著升高，至2周增高幅度最明显，