异氟醚对新生大鼠脑星形胶质细胞和行为学的影响

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1、广州中医药大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经特别加以注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名蕉盏必日期：加J牛年∑月、8日关于学位论文使用授权的声明本人完全了解广州中医药大学有关保留使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。本人授权广州中医药大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行

2、检索，可以采用影一印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。(保密论文在解密后应遵守此规定)论文作者签名三妻鱼监论文导师论文作者签名二堇鱼竖论文导师日期：加／卢于驴摘要第一章异氟醚对新生大鼠脑星形胶质细胞形态和EAAT2表达的影响目的：星形胶质细胞在神经系统发育障碍性疾病的发病机制中发挥着显著的作用。尽管最新研究表明，新生幼鼠长期暴露于异氟醚中会显著增加神经细胞的凋亡，但是否能影响脑星形胶质细胞的形态和重要功能尚有待于进一步研究。本实验将研究长时间异氟醚暴露对新生大鼠脑星形胶质细胞的形态以及兴奋性氨基酸转运体2(EAAT2)表达的影响。方法：80只出生后7天的Wistar大鼠，依据随机

3、数字表法被分配到两组：异氟醚组和对照组(n=40)。异氟醚组暴露于1．1％的异氟醚中6小时，对照组暴露在空气中6小时。在暴露后12h、24h、3day和7day的每一时间点，异氟醚组和对照组均分别取10只幼鼠处死后取脑。其中5只冷冻脑组织切片后，用胶质纤维酸性蛋白GFAP抗体和EAAT2抗体进行免疫荧光双标染色，激光共聚焦显微镜下观察拍照并用ImageJ软件分析皮质区和海马区的星形胶质细胞形态学的改变、GFAP和EAAT2及GFAP+EAAT2双标的荧光光密度值；另5只分离脑组织的皮质区和海马区，用Western—blot法检测GFAP和EAAT2表达量。结果：(1)星形胶质细胞分类计数

4、：异氟醚组的皮质区和海马区的抑制状态星形胶质细胞数目分别在暴露后12h和24h开始显著上升(氏O．05)，直至暴露后7day与对照组相比无统计学差异(胗O．05)。而休眠和激活状态的星形胶质细胞数目与对照组相比均无统计学差异(尸>0．05)。(2)免疫荧光染色及分析：与对照组比较，异氟醚组的皮质区GFAP表达在暴露后12h、24h显著性下降(P<0．05)，而海马区6FAP表达在暴露后24h、3d显著性下降(P0．05)。异氟醚组的皮质区EAAT2表达在暴露后12h、24h和3d均显著性下降(P

5、暴露后各个时间点均略有下降但均无统计学差异(胗0．05)。异氟醚组的皮质区和海马区的GFAP+EAAT2双标荧光密度在暴露后各时间点，均显著下降至暴露后7d仍未恢复(胗0．05)。(3)Western-blot检测：异氟醚组的皮质区和海马区的EAAT2和GFAP表达量在暴露后12h及24h，与对照组相比均无统计学差异(胗0．05)；在暴露后3d和7d，海马区的GFAP表达与对照组相比无统计学差异(胗0．05)，但皮质区的GFAP、皮质区和海马区的EAAT2表达均显著性下降(P<0．05)。结论：(1)长时间持续异氟醚暴露会抑制新生大鼠皮质区和海马区的星形胶质细胞发育及其表面EAAT2表达

6、。(2)异氟醚能降低新生大鼠皮质区和海马区的GFAP和EAAT2表达量。关键词：异氟醚；星形胶质细胞；胶质纤维酸性蛋白；胶质细胞谷氨酸转运蛋白2第二章异氟醚对新生大鼠成年后空间学习和记忆能力的影响目的：研究长时间低浓度吸入异氟醚对新生大鼠成年后空间学习和记忆能力的影响。方法：将20只出生后7天的Wistar大鼠，用随机数字表法分成两组：异氟醚组和对照组。异氟醚组吸入1．1％的异氟醚6h，对照组吸入压缩空气和氧气的混合气体6h，两组均维持吸入氧气的浓度为3096。在异氟醚暴露后35d，计算剩余幼鼠的存活率并进行Morris水迷宫实验(包括5天定位航行试验和第6天空间探索实验)，测试其空间学

7、习和记忆能力。结果：两组动物在暴露后35d的死亡率相比无统计学差异(P>0．05)。在定位航行实验中，异氟醚组的前三天逃逸潜伏期比对照组略长，但是无统计学差异(胗0．05)，第4天和第5天也无统计学差异(胗0．05)。在空间探索实验中，两组动物在目标象限停留时间、第一次穿越平台时间、穿越平台次数和搜索策略四个方面均无统计学差异(尸>0．05)。结论：长时间低浓度异氟醚暴露不会显著影响新生大鼠的死亡率以及成年后的认知功能。关键词：新生