大鼠脑皮质未成熟星形胶质细胞的分离、鉴定及原代培养.pdf

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1、·基础论著·大鼠脑皮质未成熟星形胶质细胞的分离、鉴定及原代培养吴炎宇侯博王伯丞郭英【摘要】目的探讨大鼠脑皮质未成熟星形胶质细胞的分离、鉴定及原代培养技术。方法采用差速贴壁法清除成纤维细胞及酶消化去除少突胶质细胞污染，应用免疫荧光进行细胞鉴定。取不同时间点的细胞在倒置显微镜下观察细胞形态变化，双重免疫荧光染色观察细胞生长过程的分化状态。结果细胞形态观察提示：6～14d细胞呈均匀扁平多角状，16d后部分细胞肥大增生，呈成熟状态。免疫组化染色显示：GFAP(+)细胞达97％。免疫荧光双重标记发现：16d后细胞表达vimentin和nes

2、tin这两种蛋白减弱。结论本实验技术可获得纯度高，形态和功能良好，表达稳定的大鼠脑皮质未成熟星形胶细胞。【关键词】神经胶质原纤维酸性蛋白质；波形蛋白；巢蛋白；未成熟星形胶质细胞Isolation，identificationandprimarycultureofimmatureastrocyteofratbraincortexWuYanyu,HouBo，WangBocheng,GuoYing．DepartmentofNeurosurgery,theThirdAfiliatedHospital,SunYet-sunUniversit

3、y,Guangzhou51063China，Correspondingauthor：GuoHng,Email：gdmcmn~@163．COrn【Abstract】0bjectiveToinvestigatetheisolation，identificationandprimarycultureofimmatureastrocytesofratcerebralcortex．MethodsMethodofdiferentialadherenceandtrypsindigestionwereusedtoremovefibroblasts

4、andoligodendrocytes，andidentifiedbyimmunofluorescence．Morphologywereobservedbyinvertedphasecontrastmicroscopeatdiferenttimepoints．Doubleimmunofluorescencestainingwasusedintheobservationofcellsdiferentiation．ResultsOver97％ofthecellsturnedouttobeGFAPpositive．Atday6-14，c

5、ellswasevenly,flat，homedinmorphology,andpartiallygrewmatureatday16．Immunofluorescencedoublelabelingshowedadecreaseofvimentinandnestinexpressionatday16．ConclusionThetechnologyofourexperimentiseficienttoabtainhighpurity,mo~hobgyandfunctionwell，andstableexpressionimmatur

6、eastrocytescellsfromratbraincortex．[Keywords]Glialfibrillaryacidicprotein；Vimentin；Nestin；Immatureastrocytes未成熟星形胶质细胞作为星形胶质细胞的前的修复，成为了当今研究神经修复的热点[3】。然而体细胞具有定向分化成成熟星形胶质细胞的潜能，对于如何快速获取大量纯化后的未成熟星形胶质但相对于成熟星形胶质细胞而言更具有可塑性。研细胞是神经修复研究的关键内容。随着细胞学研究究表明，未成熟的星形胶质细胞分泌一类蛋白促进的发展，目前对于

7、未成熟星形胶质的获取及鉴定仍突触的形成，提高神经系统的可塑性，而成熟星形缺乏比较成熟及应用广泛的方法。因此建立脑皮质胶质细胞却不再表达此类蛋白[1-2]o运用未成熟星胶未成熟星形胶质细胞的分离、纯化、鉴定及原代培质细胞移植以促进突触的再形成以促进神经损伤养技术成为了解细胞生物学特点及对精神障碍、神经性疾病等研究开展的重要前提。DOI：10．3877／cma．j．issn．1674—0785．2015．11．027材料与方法基金项目：广东省自然科学基金重点项目(S2012020010919)；高等学校博士学科点专项科研基金(2012

8、0171110083)；广东省产学研项一、实验动物目(2011B090400098)新生1d内SD大鼠5只，雌雄不限，由中山作者单位：510630广州，中山大学附属第三医院神经外科通讯作者：郭英，Email：gdmctanly@163．com大学动