缬沙坦和安体舒通对大鼠急性心肌梗死后基质金属蛋白酶及胶原的影响

《缬沙坦和安体舒通对大鼠急性心肌梗死后基质金属蛋白酶及胶原的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、缬沙坦和安体舒通对大鼠急性心肌梗死后基质金属蛋白酶及胶原的影响【摘要】目的观察缬沙坦和安体舒通对大鼠急性心肌梗死(AMI)后心肌间质基质金属蛋白酶(MMPs)及胶原水平的影响。方法SD大鼠AMI模型随机分成模型组、缬沙坦组、安体舒通组、缬沙坦+安体舒通组。每组分为1、2、3RNA及MMP9mRNA表达水平均显著低于模型组(P<0.05)。在2、3v表明结扎成功。另设假手术组，不结扎冠状动脉。24h后MI动物随机分为模型组(n=24)、缬沙坦组(n=24)、安体舒通组(n=24)和合用组(缬沙坦+安体舒通,n=24)，各组再分为不同时间段，即1、2、3g·kg-1·d-1,安体舒通组

2、药物剂量20mg·kg-1·d-1,合用组(缬沙坦30mg·kg-1·d-1+安体舒通20mg·kg-1·d-1)。药物加生理盐水2ml配成溶液，直接灌胃给药，每日1次。假手术组和对照组大鼠灌等量生理盐水。3RNA测定心肌组织总RNA的提取：Trizol试剂盒购自美国Promega公司，缬沙坦由诺华公司提供，安体舒通为杭州民生药业集团有限公司产品，引物为北京华美生物工程公司产品。取心肌组织约100mg,按实验操作规程提取RNA，之后进行RTPCR。MMP2引物序列：正义：5′GAGTTGGCAGTGCAATACCT3′，反义：5′GCCATCCTTCTCAAAGTTGT3′，M

3、MP9引物序列：正义:5′CGGTATTGGAAGTTCTCGAAT3′，反义:5′CACACGCCAGAAGTATTTGTCATG3′。参照文献，进行MMPs引物设计及合成。PCR配制反应体系，反应体系构成如下10×PCR缓冲液5μl，25mmol/LMgCl2溶液3μl，2mmol/LdNTP5μl，50pmmol/L上游引物1μl，50mmol/L下游引物1μl，cDNA2μl，TaqDNA聚合酶(3U/μl)0.7μl，DEPC水29.5μl。进行PCR，扩增后进行电泳及凝胶分析，紫外透射仪上观察结果，读胶仪读取各电泳条带的光密度值，结果以MMP2、MMP9与βac

4、tin光密度比值表示。　　1.3心肌组织免疫组化染色心肌组织用石蜡包埋后，以6μm的厚度连续切片，进行MMP2、MMP9的免疫组化染色。方法如下：石蜡切片脱蜡至水，3%甲醇双氧水室温孵育10min，消除内源性过氧化物酶的活性，蒸馏水冲洗，0.01%PBS缓冲液(pH7.4)洗5min，0.1ml枸橼酸缓冲液(pH6.0)微波抗原修复98℃20min，冷却至室温，10%正常家兔血清稀释封闭，滴加1∶50稀释MMP2、MMP9一抗4℃冰箱过夜，在清洗后，加入DAB显色剂5min，自来水终止显色，常规梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。阴性对照用PBS替代一抗，其余步骤同上。实验结

5、果判定：在细胞浆内表达，阳性反应均呈棕黄色或黄色。　　1.4心肌胶原含量及Ⅰ、Ⅲ型胶原的测定采用氯胺T法：取冻存心肌组织50mg,经脱水、脱脂，沉淀烘干并研成粉末，加入6mol/L盐酸2ml，110℃水解3.6h，调节pH至6.0，按说明书要求，用Beckman的紫外分光光度计，测各管OD值，计算出羟脯氨酸含量，心肌胶原含量等于羟脯氨酸含量×7.46，得到胶原含量。Ⅰ、Ⅲ型胶原的测定：多聚甲醛固定的心肌组织，固定12～24h后，梯度酒精脱水，常规石蜡包埋，连续石蜡切片，每片厚6μm，取3张切片分别按SP法进行免疫组化标本切片染色操作。实验结果判定：阳性反应均呈棕黄色或黄色。图像分析系统测定

6、Ⅰ型和Ⅲ型胶原阳性染色所占面积，并分别除以统计场总面积后作为Ⅰ型和Ⅲ型胶原实际面积，取8个视野的均值。最后计算Ⅰ/Ⅲ型胶原比值。　　1.5统计学方法采用SAS6.12统计软件对数据进行分析处理;各项数据均以x±s表示;采用多组间方差分析及q检验。　　2结果　　2.1各组大鼠心肌组织中MMP2、MMP9mRNA的表达模型组MMP2、MMP9mRNA表达于1～3RNA及MMP9mRNA表达水平均显著低于模型组(P<0.05)，安体舒通组MMP2mRNA及MMP9mRNA表达水平与模型组无显著差异(P>0.05)。在1、2、3RNA及MMP9mRNA表达水平显著低于安

7、体舒通组(P<0.05)。合用组MMP2mRNA及MMP9mRNA表达水平显著低于安体舒通组(P<0.05);合用组与缬沙坦组无显著性差异(P>0.05)(表1)。表1各组大鼠心肌MMP2、9mRNA的表达表2各组大鼠心肌MMP2、9蛋白的表达　　2.2免疫组织化学结果与模型组MMP2及MMP9比较，在1、2、3MP2及MMP9比较，安体舒通组阳性染色光密度积分无显著性差异(P>