缬沙坦和安体舒通对大鼠急性心肌梗死后基质金属蛋白

《缬沙坦和安体舒通对大鼠急性心肌梗死后基质金属蛋白》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、缬沙坦和安体舒通对大鼠急性心肌梗死后基质金属蛋白【摘要】目的观察缬沙坦和安体舒通对大鼠急性心肌梗死(AMI)后心肌间质基质金属蛋白酶(MMPs)及胶原水平的影响。方法SD大鼠AMI模型随机分成模型组、缬沙坦组、安体舒通组、缬沙坦+安体舒通组。每组分为1、2、3RNA及MMP9mRNA表达水平均显著低于模型组(P<0.05)。在2、3v表明结扎成功。另设假手术组，不结扎冠状动脉。24h后MI动物随机分为模型组(n=24)、缬沙坦组(n=24)、安体舒通组(n=24)和合用组(缬沙坦+安体舒通,n=24

2、)，各组再分为不同时间段，即1、2、3g·kg-1·d-1,安体舒通组药物剂量20mg·kg-1·d-1,合用组(缬沙坦30mg·kg-1·d-1+安体舒通20mg·kg-1·d-1)。药物加生理盐水2ml配成溶液，直接灌胃给药，每日1次。假手术组和对照组大鼠灌等量生理盐水。3RNA测定心肌组织总RNA的提取：Trizol试剂盒购自美国Promega公司，缬沙坦由诺华公司提供，安体舒通为杭州民生药业集团有限公司产品，引物为北京华美生物工程公司产品。取心肌组织约100mg,按实验操作规程提取RNA，之后进行R

3、TPCR。MMP2引物序列：正义：5′GAGTTGGCAGTGCAATACCT3′，反义：5′GCCATCCTTCTCAAAGTTGT3′，MMP9引物序列：正义:5′CGGTATTGGAAGTTCTCGAAT3′，反义:5′CACACGCCAGAAGTATTTGTCATG3′。参照文献，进行MMPs引物设计及合成。PCR配制反应体系，反应体系构成如下10×PCR缓冲液5μl，25mmol/LMgCl2溶液3μl，2mmol/LdNTP5μl，50pmmol/L上游引物1μl，50mm

4、ol/L下游引物1μl，cDNA2μl，TaqDNA聚合酶(3U/μl)0.7μl，DEPC水29.5μl。进行PCR，扩增后进行电泳及凝胶分析，紫外透射仪上观察结果，读胶仪读取各电泳条带的光密度值，结果以MMP2、MMP9与βactin光密度比值表示。　　1.3心肌组织免疫组化染色心肌组织用石蜡包埋后，以6μm的厚度连续切片，进行MMP2、MMP9的免疫组化染色。方法如下：石蜡切片脱蜡至水，3%甲醇双氧水室温孵育10min，消除内源性过氧化物酶的活性，蒸馏水冲洗，0.01%PBS缓冲液(pH7

5、.4)洗5min，0.1ml枸橼酸缓冲液(pH6.0)微波抗原修复98℃20min，冷却至室温，10%正常家兔血清稀释封闭，滴加1∶50稀释MMP2、MMP9一抗4℃冰箱过夜，在清洗后，加入DAB显色剂5min，自来水终止显色，常规梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。阴性对照用PBS替代一抗，其余步骤同上。实验结果判定：在细胞浆内表达，阳性反应均呈棕黄色或黄色。　　1.4心肌胶原含量及Ⅰ、Ⅲ型胶原的测定采用氯胺T法：取冻存心肌组织50mg,经脱水、脱脂，沉淀烘干并研成粉末，加入6mol/L盐酸2ml

6、，110℃水解3.6h，调节pH至6.0，按说明书要求，用Beckman的紫外分光光度计，测各管OD值，计算出羟脯氨酸含量，心肌胶原含量等于羟脯氨酸含量×7.46，得到胶原含量。Ⅰ、Ⅲ型胶原的测定：多聚甲醛固定的心肌组织，固定12～24h后，梯度酒精脱水，常规石蜡包埋，连续石蜡切片，每片厚6μm，取3张切片分别按SP法进行免疫组化标本切片染色操作。实验结果判定：阳性反应均呈棕黄色或黄色。图像分析系统测定Ⅰ型和Ⅲ型胶原阳性染色所占面积，并分别除以统计场总面积后作为Ⅰ型和Ⅲ型胶原实际面积，取8个视野的均值。最后

7、计算Ⅰ/Ⅲ型胶原比值。　　1.5统计学方法采用SAS6.12统计软件对数据进行分析处理;各项数据均以x±s表示;采用多组间方差分析及q检验。　　2结果　　2.1各组大鼠心肌组织中MMP2、MMP9mRNA的表达模型组MMP2、MMP9mRNA表达于1～3RNA及MMP9mRNA表达水平均显著低于模型组(P<0.05)，安体舒通组MMP2mRNA及MMP9mRNA表达水平与模型组无显著差异(P>0.05)。在1、2、3RNA及MMP9mRNA表达水平显著低于安体舒通组(P<0

8、.05)。合用组MMP2mRNA及MMP9mRNA表达水平显著低于安体舒通组(P<0.05);合用组与缬沙坦组无显著性差异(P>0.05)(表1)。表1各组大鼠心肌MMP2、9mRNA的表达表2各组大鼠心肌MMP2、9蛋白的表达　　2.2免疫组织化学结果与模型组MMP2及MMP9比较，在1、2、3等〔5〕研究表明，AMI后愈合过程中心肌细胞外基质的代谢是心室重塑的重要因素，而MMPs能