油菜蜂花粉多糖的提取、分离、结构及生物活性的研究

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1、事中震聋夫学Y。806855HUAZHONGAGRICU谢URALUNIVERSITY博士学位论文PHDDISSERTATlON油菜蜂花粉多糖的提取、分离、结构及生物活性的研究S阿UDIESoNE：鬈I取ACTIoN，ISoLATION，STRUCTUREANDBIoAC骶VlTIESoFPoLYSACC珏ARlDESFROM露忍4SSId￡钳M矽露S妁RIS研究生CANDlDATE导师SUPE薹tVlSOR专啦SPEaAIJTY：研究方向SUBJECr】＆杨晓萍恻GX队oPING吴谋成教授P袋ol蕾SSoRWUMoUC珏嚣NG农产品加工及贮藏工程AG

2、RICUI冱IJ黼Pl沁CESslNGANDSTORAGEENGlNEERING天然活性成分化学N枷RALAC弧VECoMpoNENTCHEMISTRy中国武汉WU拄AN，CHlNA二00五年五月Ⅳ俄y，2005油菜蜂花粉多搪的提取、分离、结构及生物活性的研究油菜蜂花粉多糖的提取、分离、结构及生物活性的研究摘要、本文以油菜蜂花粉为原料，对油菜蜂花粉多糖的提取工艺、分离纯化、结构特性进行了研究，并采用现代分子生物学技术探明了油菜蜂花粉多糖的抗肿瘤作用及其作用机制。其主要研究结果如下：1油菜蜂花粉多糖提取、分离、纯化与结构特性油菜蜂花粉经沸水浸提、乙醇沉淀

3、可得油菜蜂花粉多糖RPP。在单因素试验基础上，通过正交试验对油菜蜂花粉多糖的提取工艺进行研究，结果表明：温度对多糖得率的影响最大，其次为提取时间、次数，料液比的影响最小；其最优提取条件为：料液比1：4，90"C水浴条件下，浸提4次，每次浸提4h，提取率达1．45％。RPP经DEAE—SephadexA-25纤维索柱层析可得四种多糖IuPPl、RPP2、RPP3、RPP4，得率分别为5．76％、282％、26．8％和13．4％；经葡聚糖凝胶层析柱进一步分离纯化可知RPPI为均一多糖，RPP2、RPP3、RPP4为非均一多糖，RPP2．2、RPP3—2、R

4、PP4．1分别为其主要组分。RPPl、RPP2．2、RPP3．2、RPP4．1中性糖含量分别为：56．9％、37．5％、36．4％、4．20％，蛋白质含量分别为：10．2％、5．65％、35．6％、31．O％；糖醛酸含量分别为：8．09％、7．25％、8．96％、1．35％。气相色谱分析表明，RPP4—1为葡聚糖，RPPl、RPP2．2、RPP3．2由葡萄糖、半乳糖、甘露糖、阿拉伯糖组成，RPP2．2还含有少量木糖，各级分的摩尔比分别为：1．00：2．05：O．57：405；1oo：0．50：0．45；1，63：0．12：1．00：323：074：7．

5、21。GPC法测定RPP各级分的数均分子量分别为36137、37136、63904、57592；紫外光谱、红外光谱、NMR图谱分析推测ItPP3．2为一种毗哺型糖蛋白复合物，分子中含Ⅱ、B两种糖苷键：碱性13．消除反应说明在RPP3．2中存在0．糖苷键，刚果红试验说明油菜蜂花粉多糖不具有三螺旋结构。2油菜蜂花粉多糖体内抗肿瘤活性研究(1)RPP的抑瘤效果。动物抑制性肿瘤法试验结果表明RPP对s180肿瘤细胞有较强的抑制作用，三个灌胃剂量50、100、200nag／(kg．d)的抑瘤率分别为2689％、3445％、51．26％，存在明显量效关系，且高剂量

6、组抑瘤率明显高于常用抗癌药Cy(46．22％)。(2)RPP的免疫增强作用。RPP可显著提高荷瘤鼠免疫器官重量，增强荷瘤鼠单核细胞吞噬能力、脾淋巴细胞转化能力及NK细胞的杀伤力，将荷瘤鼠DTH反应程度、抗体水平恢复至正常水平，表明RPP具有增强荷瘤鼠特异性和非特异杨晓萍华中农业大学2005届博士学位论文性免疫功能自g作用。(3)Ⅺ干对荷瘤鼠抗氧化能力的影响。小鼠接种S180肿瘤细胞后体内抗氧化能力明显下降，RPP能显著提高荷瘤鼠体内抗氧化酶SOD、GSH—Px的活性，降低荷瘤鼠血清LDH活性，减少脂质过氧化产物MDA含量，揭示RPP可增强荷瘤鼠机体抗氧

7、化能力。(4)RPP对环磷酰胺抗癌活·性和毒·l生的影响。荷瘤鼠外周血象发生明显异常，自细胞、中性粒细胞明显增多(P

8、瘤法，以环磷酰胺为对照，观察RPP对荷瘤鼠肿瘤、肝、肾、脾组织形态的影响，结果表明RPP对荷瘤