油菜蜂花粉中黄酮等生物活性物质的提取工艺研究

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1、万方数据·968·jE塞史医药2Q鲣堡12旦筮塑鲞筮12塑垦蝤i鹳I垫盟遒堑坠地丛塑虫ChineseMedicine,Deember巡Vol：塑，丛Q!12·实验研究·油菜蜂花粉中黄酮等生物活性物质的提取工艺研究鄣雪微1卢挺2【摘要】目的研究破壁油菜蜂花粉黄酮类化合物提取的T艺。方法采用乙醇提出、水沉淀，并结合大孔树脂富集、乙醇洗脱等方法进行提取。结果花粉总黄酮的转移率达到70％以上，提取物的黄酮类化合物含量大于50％。从提取物中分离出芦丁、槲皮素、山奈酚等单体黄酮，并经核磁共振结构鉴定证实。同时，分离出B一谷甾醇、B一豆甾醇等两种生物活性物质并经核磁共振结构鉴定证实

2、。结论对破壁油菜蜂花粉黄酮类化合物提取的工艺研究取得了较好的效果。【关键词l蜂花粉；黄酮类化合物；提取工艺蜂花粉是有花植物的雄性生殖细胞。也是一种幼蜂的食粮。工蜂在采集花粉时加上自己特殊的腺体分泌物和花蜜等初步加工成花粉团。将其放入后腿的花粉筐中带回蜂房储存【1】。蜂花粉在蜂房里所有物质中最具营养价值。与其它任何食物相比，蜂花粉含有更高比例的人体必需营养成分。它能刺激器官和腺体，使人焕发青春、恢复精力并延长人的寿命。蜂花粉被证实为可增强活力和运动能力的十分有用的营养物质。可促进心率和呼吸的恢复并将其保持在正常水平，可提供能量、精力、力量并提高运动水平闭。蜂花粉也含有丰

3、富的黄酮类化合物刚。黄酮类化合物具有对人体健康有益的诸多功能，因而日益引起人们广泛的兴趣。它们有抗病毒、抗过敏、抗血凝、抗炎症、抗失调等作用四。有卓越的抗氧化作用和清除自由基能力16，71。它们可通过捕获自由基而维护细胞的质量并减小对细胞的危害．可帮助血管壁变得更能抵御有害物质损害．并降低血脂和控制血清胆固醇【lq。本研究对青藏高原油菜蜂花粉中的黄酮类化合物进行了提取分离试验。花粉先经酶解破壁处理，使其内含营养物质得以充分释放【1”，各种活性成分的提取分离就变得相对容易。再通过各种工艺方法和条件试验。对破壁花粉中的黄酮类化合物进行提取，效果较好。同时还分离出数种具有明

4、显药理作用的单体黄酮和甾醇类化合物。1试验用仪器与材料1．1仪器设备GYRONT400MHz超导核磁共振仪(荷兰飞利·首都医学科教发展基金(2005一SF—II一007)作者单位：1．102600，北京市大兴区人民医院心内科2．810008，青海省产品质量监督检验所浦)，GC一14CPTE气相色谱仪(日本岛津)，LC一10AVP高效液相色谱仪(日本岛津)，BH一2生物显微镜(OLYMPUS)，电热恒温培养箱(HH．B11．500)。磁力加热搅拌器(上海南汇电讯器材厂)，精密pH计(pHS一3B)，层析柱等装置(自制)。1．2试剂材料所用试剂均为分级纯。黄酮类化合物标准

5、品购自Sigma公司(Sr．Louis，MO)，油菜蜂花粉购自青海花宝蜂产品有限责任公司(西宁)，酶制剂(Vis．cozymeL．)购自中国食品工业(集团)公司(北京)，其它试验材料均为市售。2生物总黄酮提取试验2．1提取条件选择2．1．1萃取剂选择：从萃取物的用途和安全性考虑。试验中选用了食用酒精为萃取剂。同时对酒精的使用浓度进行了比对试验(55％、75％、95％)，结果表明，95％的酒精对黄酮的萃取率较佳。2．1．2提取方法试验：(1)热回流提取：用装有回流冷凝器的蒸馏瓶在78℃(酒精沸点)条件下，分别进行不同时间(20min、40rain、60min)的提取试验

6、，结果表明40min的提取效果较佳(提取率约为95％)。提取液经旋转蒸发浓缩后制得浸膏。(2)冷提取：在室温条件下．用10倍量的酒精浸泡花粉3次，每次7天(不时搅动)，可基本提出花粉内的黄酮类化合物(提取率约为92％)。合并3次的浸泡液，浓缩后制得浸膏。比较热提和冷提两种方法，各有利弊。热提法省时．且提取率较高，但成本投入大。冷提法节约能源，投入小．却很耗时，但此缺点可在生产中通过合理安排得以弥补。具体采用何法可根据实际情况灵活选择。万方数据韭塞生匡药2鲤墨笙12旦筮22鲞筮12塑壁曼亚坠g』螋婴尘煎墅园也型一ChineseMedicine,December,2008

7、．V01．27,No．122．2破壁油菜花粉中总黄酮产业化提取工艺研究2．2．1试验样品：(a)乙酸乙酯总提物，(b)大孔树脂柱层析总提物，(c)硅胶柱层析总提物，(d)分步冷沉物。2．2．2不同工艺条件花粉黄酮的分析：对破壁花粉的乙醇提取物．采用不同的富集纯化方法，进行产业化最佳工艺的预试．并对实验所得的花粉粗酮进行总黄酮的比色法和色谱归一化法对比分析(表1)。结果显示：a、b两种方法所得的花粉粗酮中的总黄酮转移率偏低。而c、d两种方法所得的花粉粗酮总黄酮含量较高．且花粉黄酮的主要成份分布基本一致(参见HPLc图)．证明该工艺可行。但由于硅胶(c)