多酶体破壁提取蜂花粉中活性蛋白的工艺研究

《多酶体破壁提取蜂花粉中活性蛋白的工艺研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、万方数据24福建中医学院学报2009年6月第19卷第3期JournalofFujianUniversityofTCMJune2009，19(3)多酶体破壁提取蜂花粉中活性蛋白的工艺研究杨义雄．王宫(福建省中医药研究院，福建福州350003)关键词：蜂花粉：多酶体：破壁中图分类法：R282．702文献标识码：B文章编号：1004—5627(2009)03-0024—03花粉壁可分为外壁和内壁。外壁主要为纤维素、孢粉素等；内壁则由果胶质、纤维素、半纤维素等组成[¨。未经破壁的花粉结构致密，内含的生物活性物质释放慢且不完全。

2、传统的破壁多采用机械破壁和酶解破壁法[2,31。前者在生产过程中有可能带入过量的重金属：而后者多用单一酶或2种酶．酶解效果有待提高。有报道用微波、微生物发酵、温差等方法[·~s]进行破壁，但均未应用到规模化生产．中。我们根据蜂花粉的细胞特征，采用多种生物酶混合的多酶体系对蜂花粉进行酶解破壁，采用单因素和正交实验法相结合筛选酶解条件，在保证蜂花粉高破壁率的前提下。提高了蜂花粉中蛋白质的提取率．比普通机械破壁和一般生物酶破壁法更为经济、环保、安全．适用于工业生产，是一种花粉破壁的新方法。1仪器和材料电热恒温培养箱(苏州市大

3、隆仪器仪表有限公司，HPX一9052MBE)；分析天平(上海奥豪斯国际贸易有限公司，AR2140)；雷磁pH计(上海楚柏实验室设备有限公司，PHS一3C)，显微镜(日本奥林巴斯光学工业公司，CX40)。油菜蜂花粉由福建农林大学提供；纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶活性单位20000U／g，由福州福达生物工程有限公司提供；水为蒸馏水。2方法2．1单因素法先用单因素法考察交互影响相对较弱、水平较多的因素，包括酶解时间、酶解pH、酶解温度的最佳条件。2．2正交实验法在选定的时间、pH和温度下，进行正交实验。以花粉破壁率和粗蛋白提取

4、率为指标，考察纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶及加水量对实验结果的影响，从而筛选出最佳的酶解破壁工艺条件。2．3破壁率测定方法吸取适量花粉酶解后的混悬液滴在血球计数板上。在显微镜下观察记数。2．4粗蛋白检测方法根据GB仍009．5—2003食品中蛋白质的测定通则检测。3结果3．1单因素法3．1．1酶解时间对破壁率和粗蛋白提取率的影响称取蜂花粉100g，加水200mL，加入纤维素酶收稿日期：2009—03—03基金项目：福建省科技合作重点项目(200610029)作者简介：杨义雄(1972一)，男，实验帅，主要从事中药化学成分

5、的研究。_‘-一，“，㈣，●‘，⋯，⋯，M，一●_验七叶莲片质量的一个重要指标。本实验方法测定七叶莲片中的反丁烯二酸含量。较为简便易行，方法稳定、可靠．结果准确。可以用以控制和检验药品的质量．为有效控制该药品的质量提供检测依据。3．2供试品甲醇超声处理后直接进样色谱峰脱尾严重，采用挥干甲醇。流动相溶解可获得理想的峰形．且在热水浴中超声处理才能使样品溶解完全．重复性好。参考文献：[1]陈蕾，朱霁虹，林瑞超．鹅掌藤属植物化学成分及生理活性研究概况[j]．中药材，2002，25(5)：363—366．[2]王大林．三丁酸钠注

6、射的试制研究[J]．中草药通讯．1979，10(12)：4-6．万方数据第3期杨义雄等：多酶体破壁提取蜂花粉中活性蛋白的工艺研究25l％、果胶酶0．2％、木聚糖酶1％，在温度50。C、pH5的条件下酶解。结果见表l。在6h内随着酶解时间的延长，破壁率和粗蛋白提取率逐渐提高。6h后，延长时问对结果影响不大。说明已基本酶解完全．因此适宜的酶解时间定为6h。表1酶解时间对破壁率和粗蛋白提取率的影响3．1．2酶解pH对破壁率和粗蛋白提取率的影响称取蜂花粉100g．加水200mL，加入纤维素酶1％、果胶酶0．2％、木聚糖酶1％，

7、在温度50℃、选定的pH条件下，酶解6h。结果见表2。pH值为5时复合酶活性最高，破壁率和粗蛋白提取率均达到最大值。因此适宜的酶解pH值为5．0。3．1．3酶解温度对破壁率和粗蛋白提取率的影响称取蜂花粉100g，加水200mL，加入纤维素酶1％、果胶酶0．2％、木聚糖酶l％，在pH5、不同温表2酶解oH对破壁率和粗蛋白提取率的影响度条件下，酶解6h，结果见表3。从表3可见，最适温度为50℃。表3酶解温度对破壁率和粗蛋白提取率的影响3．2正交实验对酶解时间、pH和酶解温度进行单因素法筛选选后．用正交试验法考察复合酶用量和

8、加水量的最佳条件。按七因素三水平正交设计原理进行实验，因素和水平见表4。以破壁率和粗蛋白提取率为考察指标，结果见表5。方差分析见表6。表4L，。(37)因素和水平表表6粗蛋白提取率的方差分析3．3分析与结论对正交实验的结果进行直观分析．可以看出各因素对蜂花粉破壁率的影响程度为A>B=C>D．各因素对粗蛋白提取率的影响程度为A>C>